玄参内生真菌分离、鉴定及系统发育分析

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1、玄参内生真菌分离、鉴定及系统发育分析　　[摘要]分别从武隆产区玄参根、主茎、侧枝、叶片和重庆市区栽培玄参侧枝中分离内生真菌，根据形态学特征和26SrDNAD1/D2测序结果对其进行鉴定，并进行了种群多样性分析，对优势属炭疽菌属内生真菌构建了系统发育树。试验结果显示：真菌种群多样性指数，武隆玄参叶片>主茎=侧枝>根，重庆玄参侧枝>武隆玄参侧枝。共计分离得到内生真菌58株，绝大部分是各种植物病原菌，其优势属为刺盘孢属Colletotrichum，其中绝大多数是C.gloeosporioides和C.boninense。叶片和子芽可能是内生菌侵染的主要途径

2、；内生菌和病原菌可能相互转化，受环境、基因型等多种因素影响。　　[关键词]玄参；内生真菌；鉴定；系统发育分析　　[Abstract]Theendophyticfungifromroot，mainstem，branchandleafofScrophularianingpoensiswereisolatedandidentifiedfromWulongandChongqing，andthepopulationdiversityanalysisandphylogeneticanalysiswerefollowed.Theresultindicatedtha

3、t，astopopulationdiversityindex，S.ningpoensisfromWulong：leaf>mainstem=branch>root，branchfromChongqing>branchfromWulong.Fifty-eightendophyticfungiwereobtained，mostofwhichwerethepathogensoftheplant.Colletotrichumwastheprevailinggenus，ofwhichC.gloeosporioidesandC.boninensewerethepr

4、evailingstrains.Leafandseedlingsmightbethemainpathofinfection.Endophyticfungiandpathogenmightconverttoeachother，influencedbysuchfactorsasenvironment，genotypeetal.　　[Keyword]Scrophularianingpoensis；endophyticfungi；identification；phylogeneticanalysis　　玄?⑽?玄参科玄参属植物玄参Scrophulariani

5、ngpoensis的干燥根，始载于《神农本草经》，性微寒，味甘、苦、咸，具有凉血滋阴、泻火解毒的功效，主治热病伤阴诸证，如骨蒸、痨咳、津伤便秘、温毒发斑，及目赤、咽痛、臃肿等[1]。玄参是我国大宗药材品种，市场需求巨大。目前玄参栽培以施用化肥为主，多年连续施用影响药材品质，损害土壤肥力，破坏生态环境。而很多植物内生菌对宿主具有明显的促生作用。内生菌（endophyte）广泛存在于植物各器官、组织细胞内及细胞间隙，其种类随宿主植物种类、植株器官、地域、季节气候而变化，具有丰富的多样性，国内外相关研究报道很多[2-5]。有研究表明，内生菌及其代谢产物具有

6、拮抗、促生长、抗肿瘤等多种活性，可广泛应用于农业、工业、医药领域[6-9]。玄参内生菌方面的研究极少，仅见文献报道了玄参块根内生菌产哈巴俄苷的相关研究，且未明确鉴定出内生菌的种类[10]。本研究对玄参内生真菌进行了分离和鉴定，并对优势属炭疽菌属内生真菌进行了系统发育分析，旨在为筛选对玄参具有促生长作用的内生真菌，研发微生物肥料，减少化肥施用奠定基础。同时也揭示了玄参内生真菌的分布规律，为进一步研究玄参化学成分与内生菌的相关性，筛选活性物质提供前期基础。　　1材料　　1.1试验材料采集　　2015年8月，在玄参生长盛期，分别采取重庆市中药研究院植物园（

7、以下简称植物园，海拔400m，北纬29.35°，东经106.33°）人工栽培玄参的侧枝和重庆武隆仙女山杨柳村玄参基地（海拔1350m，北纬29.43°，东经107.77°）人工栽培玄参全株（叶、主茎、侧枝、根），采回后立即进行内生真菌分离。　　1.2试剂与仪器　　Takara9164和RR178试剂盒购自宝生物公司。DYY-6C水平电泳仪，PTC-100型PCR仪，GelDocXR凝胶成像仪。　　1.3培养基　　马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：土豆200g，切碎块，煮汁过滤，加葡萄糖20g，琼脂粉7g，定容至1L。　　2方法　　2.1内生真菌分离与

8、纯化　　植物园栽培玄参植株上部、中部、下部健壮无病虫害侧枝各取3～5枝，全部混合后剪3cm长小段。仙女山玄参