玄参内生真菌分离、鉴定及系统发育分析

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1、玄参内生真菌分离、鉴定及系统发育分析关键字：玄参,参内,内生,真菌,分离,鉴定,系统,系统发育,发育,分析玄参内生真菌分离、鉴定及系统发育分析本文为Word文档，感谢你的关注！　　[摘要]分别从武隆产区玄参根、主茎、侧枝、叶片和重庆市区栽培玄参侧枝中分离内生真菌，根据形态学特征和26SrDNAD1/D2测序结果对其进行鉴定，并进行了种群多样性分析，对优势属炭疽菌属内生真菌构建了系统发育树。试验结果显示：真菌种群多样性指数，武隆玄参叶片>主茎=侧枝>根，重庆玄参侧枝>武隆玄参侧枝。共计分离得到内生真菌58株，绝大部分是各种植物病原菌，其优势属为刺盘孢属Colletotri

2、chum，其中绝大多数是C.gloeosporioides和C.boninense。叶片和子芽可能是内生菌侵染的主要途径；内生菌和病原菌可能相互转化，受环境、基因型等多种因素影响。　　[关键词]玄参；内生真菌；鉴定；系统发育分析　　[Abstract]Theendophyticfungifromroot，mainstem，branchandleafofScrophularianingpoensiswereisolatedandidentifiedfromWulongandChongqing，andthepopulationdiversityanalysisandphyl

3、ogeneticanalysiswerefollowed.Theresultindicatedthat，astopopulationdiversityindex，S.ningpoensisfromWulong：leaf>mainstem=branch>root，branchfromChongqing>branchfromWulong.Fifty-eightendophyticfungiwereobtained，mostofwhichwerethepathogensoftheplant.Colletotrichumwastheprevailinggenus，ofwhich

4、C.gloeosporioidesandC.boninenseweretheprevailingstrains.Leafandseedlingsmightbethemainpathofinfection.Endophyticfungiandpathogenmightconverttoeachother，influencedbysuchfactorsasenvironment，genotypeetal.　　[Keyword]Scrophularianingpoensis；endophyticfungi；identification；phylogeneticanalysis

5、　　玄�⑽�玄参科玄参属植物玄参Scrophularianingpoensis的干燥根，始载于《神农本草经》，性微寒，味甘、苦、咸，具有凉血滋阴、泻火解毒的功效，主治热病伤阴诸证，如骨蒸、痨咳、津伤便秘、温毒发斑，及目赤、咽痛、臃肿等。本研究对玄参内生真菌进行了分离和鉴定，并对优势属炭疽菌属内生真菌进行了系统发育分析，旨在为筛选对玄参具有促生长作用的内生真菌，研发微生物肥料，减少化肥施用奠定基础。同时也揭示了玄参内生真菌的分布规律，为进一步研究玄参化学成分与内生菌的相关性，筛选活性物质提供前期基础。　　1材料　　1.1试验材料采集　　2015年8月，在玄参生长盛期，分别

6、采取重庆市中药研究院植物园（以下简称植物园，海拔400m，北纬29.35°，东经106.33°）人工栽培玄参的侧枝和重庆武隆仙女山杨柳村玄参基地（海拔1350m，北纬29.43°，东经107.77°）人工栽培玄参全株（叶、主茎、侧枝、根），采回后立即进行内生真菌分离。　　1.2试剂与仪器　　Takara9164和RR178试剂盒购自宝生物公司。DYY-6C水平电泳仪，PTC-100型PCR仪，GelDocXR凝胶成像仪。　　1.3培养基　　马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：土豆200g，切碎块，煮汁过滤，加葡萄糖20g，琼脂粉7g，定容至1L。　　2方法　　2.1内生真

7、菌分离与纯化　　植物园栽培玄参植株上部、中部、下部健壮无病虫害侧枝各取3～5枝，全部混合后剪3cm长小段。仙女山玄参植株分解为块根、主茎、侧枝、叶片。块根洗去泥土，轻轻刮去表面薄皮，洗净，切小块；植株主茎上部、中部、下部各取一段（约15～20cm长）后混合，剪3cm长小段；植株上部、中部、下部健壮无病虫害侧枝各取3～5枝，全部混合后剪3cm长小段；植株上部、中部、下部健壮无病虫害叶片各取4～6片后全部混合，剪3～4cm　　2.2内生真菌鉴定　　2.2.1形态观察观察培养的内生真菌菌落形态，对照《真菌鉴定手册》[11]，根据菌落以及菌丝体和