广西多叶越南槐hplc指纹图谱的研究及与山豆根指纹图谱一致性比较研究

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1、广西多叶越南槐HPLC指纹图谱的研究及与山豆根指纹图谱一致性比较研宄广西玉林市陆川县人民医院广西陆川537700摘要：目的：以广西不同产地的多叶越南槐为研宄对象，建立多叶越南槐的HPLC指纹图谱，通过指纹图谱比较多叶越南槐与山豆根的一致性，为科学评价和有效控制多叶越南槐药材的质量提供参考依据，为多叶越南槐与III豆根同源性研究提供数据参考。方法：采用高效液相色谱技术，色谱柱AgilentEclipse-C18(150mm×4.6mm,5um),流动相：乙腈-0.05mol/L磯酸二氢钾溶液(用三乙胺调PH6.45)梯度洗脱，检测波长215nm,柱温30°C,流速

2、l.Oml/min,进样量为10μl。采用《屮药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》计算机软件计算10批药材的相似度。结果：指纹图谱的方法考察包括精密度、稳定性和重复性实验，均符合有关规定，建立的多叶越南槐指纹图谱有14个共有峰，并利用对照品的保留时间及DAD的紫外图谱双指标定性，指认丫7个共有峰；每批药材指纹图谱比较相似度均在0.9以上；多叶越南槐与山豆根指纹图相比较，相似度均在0.9以上。结论：该方法精密度、稳定性及重现性较好，特征性及专属性强，可以有效地用于多叶越南槐药材的质量控制，为开发和利用多叶越南槐药材资源提供科学依据，通过多叶越南槐与山豆根指纹图谱的

3、比较，可推测出多叶越南槐与山豆根成分相似，亲缘性关系相近。关键词：多叶越南槐；山豆根；HPLC；指纹图谱多叶越南槐为豆科槐属植物，是越南槐的一个变种，分布于广西、广东、云南、贵州和江西等省［1］。其性寒，味苦，具有淸热解毒、消肿利咽之功效，常用于火毒蕴结，咽喉肿痛，齿龈肿痛，肺热咳嗽，肝炎等疾患的治疗。张颖、钟正贤［2］等对多叶越南槐的药理作用进行研宄，得出多叶越南槐具有一定的抗炎、镇痛、抗肝损伤、抗肺栓塞，免疫增强和抗疲劳作用。多叶越南槐与山豆根同属豆科植物越南槐的不同种，主要成分为生物碱，包括苦参碱，氧化苦参碱，槐果碱，槐醇等。王守柏［3］等研究发现，M—植株越南槐中的

4、生物碱在地下根茎中含量为最高，达到1.86%。广西中医药研究院卢文杰研究员等对多叶越南槐化学成分进行了研宄，从多叶越南槐中分离出苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、高丽槐素、芒柄花素、红车轴草卄等成分。植物药具有复杂的化学成分，而其活性成分常常不只一种成分，本文首次采用HPLC法对广西不同产地的多叶越南槐进行指纹图谱的研究并将多叶越南槐图谱与山豆根图谱进行比较，为系统、科学地评价和冇效控制多叶越南槐药材的质量提供了科学依据，为研宄多叶越南槐与山豆根同源性提供科学依据。1仪器与试药1.1仪器Agilentl200高效液相色谱仪（美国安捷仑公司）;超纯水器（MIUJPORE

5、公司）；TP-214电子分析天平（南京庚辰科学仪器有限公司）；CXP-100型多功能粉碎机（上海市晟喜制药机械冇限公司）；津腾溶剂过滤器；HH-S6数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）；中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版（国家药典委员会）1.2试药槐果碱、氧化槐果碱、高丽槐素、芒柄花素、红车轴草苷对照品；苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品；甲醇（分析纯），甲醇（色谱纯）；无水乙醇（分析纯），氨水（分析纯），三氯甲烷（分析纯），乙腈（色谱纯）。2色谱及检测条件的选择为了使多叶越南槐中的主要成分能够在HPLC指纹图谱中得到充分反映，因此必须确定一个冇效的色谱分离方法及检测条件

6、。由于影响样品分离的因素很多,我们从主要的二方面进行了考察：流动相的选择，检测波长的选择。2.1流动相的选择本文分别采用乙腈-水（0.2%磷酸+0.32%三乙胺）系统［4］,乙腈-0.1%磷酸系统，乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（三乙胺调PH6.45）系统［5］，对多叶越南槐的HPLC图谱进行考察。由实验所得图谱可看出乙腈-0.1%磷酸系统的色谱虽然基线平稳，但峰数少；乙腈-水（0.2%磷酸+0.32%三乙胺）系统出峰过快，峰数较少；结果以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（三乙胺调PH6.45）系统的分离效果最好，基线较平稳，峰数多，出峰吋间适中。故选乙腈-0

7、.05mol/L磷酸二氢钾溶液作为流动。2.2检测波长的选择文献中的检测波长一般是为了测定某一确定成分的，不一定完全适合指纹图谱的需要，为了获取多层次的信息，需要选择多个不同的检测波长进行考察。本实验考察了205nm、210nm、215nm、220nm、254nm、280nm不冋波长下的指纹图谱，实验表明，在210nm、215nm、220nm处各峰均有较好的紫外吸收，色谱信息丰富，共有峰面积占总峰面积比例大。我们选215nm作为检测波长。2.3确定色谱检测条件色谱柱:AgilentEclipseXDB-C18检测波