人参中苯甲酸胁迫响应基因wrky7的克隆与表达分析

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1、人参中苯甲酸胁迫响应基因WRKY7的克隆与表达分析　　[摘要]WRKY转录因子是高等植物中最重要的转录因子基因家族之一，其在植物形态建成、生长发育以及应对生物（病菌、害虫等）、非生物（干旱、盐、冷、热等）胁迫过程中发挥重要作用。该研究根据人参化感自毒物质苯甲酸诱导的人参转录组数据，设计全长扩增引物，利用RTPCR方法获得1条编码WRKY转录因子的基因，暂命名为WRKY7，并对其进行TA克隆、测序和序列分析。该基因cDNA全长1216bp，其开放阅读框（openreadingframe，ORF）为1014bp，编码337个氨基酸。序列分析及系统进化

2、分析表明，该蛋白属于WRKY家族第Ⅲ类成员，与西洋参种的WRKY6转录因子亲缘关系最近，同源性为87%。实时荧光定量PCR分析发现，苯甲酸胁迫后WRKY7的表达量显著升高，推测该基因可能参与了人参响应苯甲酸胁迫的过程，为进一步研究人参自毒胁迫响应的分子机制奠定了基础。　　[关键词]人参；WRKY转录因子；化感自毒作用；克隆；序列分析　　[Abstract]WRKYtranscriptionfactorisoneofthemostimportanttranscriptionfactorfamilieswidelyexistinginhigherpl

3、ants，whichplayingcriticalroleinplantmorphogenesis，development，biotic（includingphytopathogens，pestsetc.）andabiotic（drought，salt，chilling，hightemperature，etc.）stress.Inthepresentwork，primersusedtoamplifyfulllengthgeneencodingWRKYtranscriptionfactorweredesignedbasedonthetranscri

4、ptomedataofP.ginsengthatinducedbybenzoicacid，oneofthemostimportantautotoxinsidentifiedfromrootexudatesandrhizospheresoilofP.ginseng.Then，aWRKYgene，temporarilynamedasWRKY7，wasconfirmedbyRTRCR.Furthermore，sequencingandsequenceanalysisofWRKY7wasconducted.Resultsindicatedthat，the

5、fulllengthcDNAofWRKY7was1216bp，theopenreadingframe（ORF）ofwhichwas1014bp，encodes337aminoacids.Homologousanalysisandphylogenetictreeshowedthat，WRKY7belongedtotheⅢcategoryofWRKYfamilies，whichshowing87%similaritytoWRKY6inP.quinquefolius.RealtimePCRresultsshowedthattheexpressionof

6、WRKY7inP.ginsenginducedbybenzoicacidwasupregulatedmarkedlythanthecontrol，sowespeculatedthatWRKY7wasinvolvedintheresponsetobenzoicacidstress，whichwillbehelpfulforfurtherresearchonthemolecularmechanismofginsengplantresponsetobenzoicacidstress.　　[Keywords]Panaxginseng；WRKYtransc

7、riptionfactors；autotoxicity；cloning；bioinformaticanalysis　　?D录因子是一类含有DNA结合域的蛋白质，能识别基因上游特异的核苷酸序列，形成转录复合体从而激活或抑制靶基因的表达，WRKY是植物十大转录因子家族之一。这类转录因子最早发现于甘薯[1]，后相继从20余种植物中分离出WRKY转录因子[2]。WRKY蛋白的共同特点是含有60个氨基酸组成的WRKY结构域，在N端有一段高度保守的WRKYGQK多肽序列，其是WRKY结构域的核心，如果上述氨基酸发生变异，将直接影响WRKY转录因子的DNA结合

8、活性[3]。根据WRKY转录因子结构域的数量和锌指结构，可将WRKY转录因子分为3类[4]：第Ⅰ类含有2个WRKY结构域，其锌指结构为C