亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆袋及其照射柜的血浆hbv病毒灭活效果

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1、亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆袋及其照射柜的血浆HBV病毒灭活效果【关键词】亚甲蓝光化学法血液检测病毒性疾病成分输血在临床上应用日益广泛，尤其是血浆用量日益增大，输血安全口益受到人们重视，对血浆的病毒灭活是保障输血安全的措施之一。在血浆的病毒灭活各方法中，亚甲蓝光化学法的效果已被证实，其病毒滴度减少程度与所用的光照强度和亚甲蓝(MB)浓度有直接关系。亚甲蓝光化学法对经血传播的HBV、HCV、HIV等脂质包膜病毒均有较好的灭活效果。但亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒的效果受到各因素如光照时间、光照强度、血浆量及亚甲蓝浓度等影响。于是在应用亚甲蓝光化学法设计相关

2、产品时会受到上述各种因素的制约。目前将此法应用到血浆袋的报道极少。本研究采用以亚甲蓝光化学法设计的血浆病毒灭活剂过滤血浆袋及配套使用的血液照射柜，将亚甲蓝光化学法灭活病毒过程中的各步骤规范化、整体化、标准化，消除了病毒灭活过程中隐含的各种干扰因素，从而找到了一条将亚甲蓝光化学法应用于血浆袋的有效途径。1材料与方法1.1材料与仪器病毒灭活剂(亚甲蓝)过滤血浆袋(100，5套，生产批号：20060321，威海高分了材料公司)；血液照射柜(照度50000Lux，威海高分子材料公司)；威海市中心血站采集已鉴定为乙肝阳性病人的血液，并分离血浆(每袋100ml

3、，共5袋)；荧光定量PCR检测仪(型号码ABIprism-7000)；HBV-DNA荧光定量PCR榆测试剂(由中山大学达安基因股分有限公司提供，批号20060412)；Eppendorf管(EP管)。1.2方法1.2.1标本病毒灭活将装有已鉴定为乙肝阳性病人血浆的血浆袋浸入75%的酒精溶液30min进行表面消毒后，移至超净工作台内，取样200ul于EP管内保存，作为光照前的病毒标本。在超净工作台内，将留样管封口，同时打开病毒灭活剂过滤血浆袋，用插袋针刺破装有血浆袋插口，将血.浆袋高搁，使袋内的血浆流经加药器完全进入病毒灭活剂过滤血浆袋，打开血液照射

4、柜制冷开关，使血液照射仪内的温度显示为4摄氏度。将病毒灭活剂过滤血浆袋放入血液照射仪内进行照射，每隔5、10、30min在超净工作台内取200ul样本放入EP管内，待检测。1.2.2HBV—DNA检测1.2.2.1标本处理取血浆标本40ul，加等量DNA提取液打匀，100摄氏度电热恒温金属浴10min(误差不超过1分钟)，10000rpm离心5min，取上清液2ul做PCR反应。1.2.2.2PCR扩增取HBV-PCR反应管，分别加入处理后样品、阴阳性质控品和阳性梯度各2ul，6000rpm离心1分钟。将各反应管放入定量PCR仪器的孔反应槽内，按对

5、应顺序设置阴、阳性质控品，阳性定量质控标准品梯度以及未知标本，并设置样品名称，检查循环条件：93摄氏度一2分钟预变性，然后按93摄氏度45秒-55摄氏度60秒，先做10个循环，然后按93摄氏秒-55摄氏度45秒，做30个循环。1.2.2.3结果分析条件设定反应结束后保存检测数据文件。根据分析后图像调节baselibne的start值(2-4)，stop值(7-9)以及Threshold值，使stdcurve窗口下的标准曲线图达到最佳，coion数值介于(-0.97)——(-1)之间。最后记录仪器自动分析计算出未知标本数值。1.2.3统计学处理所得结

6、果以均值±标准差表示，采用X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1标本病毒灭活前后血浆HBV—DNA浓度结果见表1表1标本病毒灭活前后血浆HBV—DNA载量(COPY/ml)注：P<0.055袋血浆标本在未光照时HB～一DNA浓度分别为4.9×104、4.7×104、5.6×103、3.4×10s、4.7×106(COPY/ml)，经光照后随时间延长(5、10、15、30min)HBV—DNA浓度逐渐降低，30min后浓度均下降为<1000(COPY/ml)，其中样品1和样品2起始浓度在所有样品中最低，该样品病毒被灭

7、活时间最短，仅有15mim。2.2标本HBV灭活的动力学曲线如图1将灭活前血浆HBV-DNA浓度作为100%，灭活不同时间血浆中残留的HBV-DNA浓度的比值以百分数表示作为纵坐标，以不同光照时间作为横坐标，绘制病毒灭活的动力学曲线。我国是乙型肝炎的高发区，特别是东部沿海和长江以南地区，而且感染人群主要分布在10-14岁和30-35岁两个年龄组。据统计我国人群HBV感染率平均9.75%。目前我国临床输血主要为人群的无偿献血，如此高的HBV人群感染率使得人们虽然在献血，之前都要经过严格的检查程序，但仍不能保证血站采的血源100%不含有HBV病毒，并且

8、血.站在对血样进行成分处理时也不能保证其100%不受HBC污染。与HBV病毒作斗争，遏制HBV在我国的流行传播是很艰巨的任