分光光度法测定毛老虎茎中三萜酸的总含量

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1、分光光度法测定毛老虎茎中三萜酸的总含量黄秀香，袁霞，林翠梧，陈丽芬【关键词】毛老虎；,,分光光度法；,,香草醛　　摘要：目的建立香草醛-冰醋酸体系分光光度法测定毛老虎中总三萜酸的方法。方法利用在高氯酸的条件下香草醛-冰醋酸与三萜酸的反应测定总三萜酸。结果总三萜酸在2.53～13.14μg/ml呈良好的线性关系，测定样品回收率为99.07%。结论该法简便、快速、灵敏。　　关键词：毛老虎；分光光度法；香草醛　　DeterminationofTotalContentofTriterpenoidsinStemsofHypt

2、issuaveolens(L.)PiotbySpectrophotometry　　Abstract：ObjectiveTodevelopthedeterminationmethodoftotaltriterpenoidsinvanillinglacialaceticacidsystembyspectrophotometry.MethodsVanillinl.Theaveragerecoveryethodissimple,easyandreproducible.　　Keyetry;Vanillin　　毛老虎Hypti

3、ssuaveolens(L.)Piot为唇形科山香属植物，别名山薄荷、假藿香，本属植物共约400种，绝大多数均有药用价值。《全国中草药汇编》载：“辛、苦、平。疏风利湿，行气散淤。主治感冒头痛，胃肠炎，痢疾，腹胀；外用治跌打肿痛，创伤出血，虫蛇咬伤，湿疹，皮炎〔1〕。”从毛老虎中提取三萜酸国内还未见报道，印度的Mistra,TrunaN等〔2〕曾报道从毛老虎中提取得到三萜酸，我们做预实验时，用熊果酸标准品作TLC对照实验，以1%香草醛浓硫酸溶液显色，两者显示出Rf值相同的樱红色斑点。为了进一步研究三萜酸，本实验以熊果

4、酸为对照品采用香草醛-冰醋酸比色，在高氯酸条件下对毛老虎茎中总三萜酸进行测定，从而有效优化总三萜酸的提取工艺。　　1器材　　UV2501紫外分光光度计（日本岛津）：KSB1200型数控超声波细胞粉碎机（昆山市超声仪器有限公司）；试剂：高氯酸、冰醋酸、香草醛、无水乙醇均为分析纯，熊果酸购于中国药品生物制品鉴定所；毛老虎采集于广西南宁市效区。　　2方法　　2.1对照品溶液的配制精密称取熊果酸对照品8.1mg，置100ml容量瓶中，用无水乙醇超声溶解，并定容至100ml，即得。　　2.2测定方法取适量标准（或样品）溶液，

5、水浴挥干，加5%香草醛-冰醋酸液0.4ml，加高氯酸0.8ml,置60℃水浴加热15min，冰浴冷却后，加冰醋酸5.0ml，摇匀，待测。　　2.3影响本法的各种因素选择5%香草醛-冰醋酸溶液用量、高氯酸用量、水浴加热温度、水浴加热时间等4个因素，每个因素选择3个水平，编制因素水平表，见表1〔3〕。　　表1实验因素水平（略）　　3结果　　3.1测定波长选择分别取样品及标准溶液适量，按“测定方法”项下处理后，在400～650nm范围内扫描，对照品溶液和样品溶液均在550nm处有最大吸收，确定550nm为测定波长。　　表

6、2正交实验结果（略）　　由表2中极差R值大小显示，各因素作用主次为A＞C＞D＞B，因此以A2B2C3D2为佳，即最佳反应条件为：5%香草醛-冰醋酸液加入量为了0.4ml，高氯酸加入量为0.8ml，水浴加热温度为60℃，水浴加热时间为10min。　　3.2正交实验结果取熊果酸标准溶液0.5ml，分别按正交实验因素水平表中各个因素进行实验，然后测定吸收度，结果见表2。　　3.3方差分析将正交实验结果进行方差分析，结果见表3。表3中方差分析结果表明，相对于B因素，A因素有显著性意义。　　3.4反应稳定性实验取适量熊果酸标

7、准溶液，按“测定方法”项下处理，对生成的紫红色产物的稳定性进行考察，结果表明反应产物在10～60min内进行测定较为稳定，60min之后吸收度明显下降。　　3.5工作曲线精密吸取熊果酸对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2ml，按“测定方法”项下处理，在550nm处测定吸收度，以熊果酸浓度为横坐标，吸收值为纵坐标，作图得标准曲线，其回归方程为：Y=0.0358X+0.0033,r=0.9997，表明熊果酸在此2.53～13.14μg/ml范围内呈良好线性关系。　　3.6样品含量测定取从毛老虎茎中提

8、的3批粉末，在钵体中研匀，60℃干燥至恒重。精密称取适量于25ml容量瓶中，用无水乙醇超声溶解，并定容至25ml，即得。按“测定方法”项下，对样品中总三萜酸提取物进行测定，其结果总三萜含量为2.96%，见表4。　　表3方差分析（略）　　表4毛老虎提取物总三萜酸含量测定结果（略）　　3.7回收率实验精密称取已知含量的样品，准确加入熊果酸对照品进行测定分析，回收