酪蛋白粗提取实验报告

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1、今年以来我们在上级党组织的领导和区精神文明办的关心支持指导下坚持以邓小平理论和三个代表重要思想为指导认真落实科学发展观酪蛋白粗提取实验报告篇一：实验一蛋白质含量测定方法的研究　　生物化学实验预习报告　　实验一蛋白质含量测定方法的研究　　一、研究背景紧紧围绕中心工作以创建区级文明单位活动为载体切实加强思想道德建设和企业文化建设深入开展群众性的精神文明创建活动今年以来我们在上级党组织的领导和区精神文明办的关心支持指导下坚持以邓小平理论和三个代表重要思想为指导认真落实科学发展观　　蛋白质含量的测定广泛应用于生产实践、医药卫

2、生等各个领域，如测定牛奶等食品中蛋白质的含量作为其营养成分的参考值，测定病人尿液中蛋白质的含量以检测其是否患有某种疾病等，因而测定蛋白质的含量具有非常重要的意义。由于蛋白质本身具有一系列的特点（如具有等电点、富含有机氮、含有肽键、存在某些含共轭双键的氨基酸残基、可与某些染料结合等），利用它的这些特点可以通过特定的化学反应或者某些物理手段，将一定量的蛋白质转化为可以方便定量测定的其他量，从而达到测定蛋白质含量的目的。蛋白质诸多特点的存在决定了它会有不同的测定方法，同时由于多种非蛋白组分的存在和干扰以及各种方法本身的局限

3、性（适用条件），每一种测定方法都有各自的优缺点，某一种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，所以多种测定方法的共存是有意义的。目前常用的蛋白质含量测定方法有四种：凯氏定氮法、Folin-酚法、考马斯亮蓝（G-250）法、紫外法，其中后三种方法最常用。在实际工作中，需要根据所测定对象的具体情况综合考虑各种因素(如实验器材的限制、实验所要求的灵敏度和精确度、所测定蛋白质的种类与性质、溶液中存在的干扰物质、测定所花费的时间等)，有选择性地使用某种方法。　　二、研究目标　　1.掌握常用的蛋白质含量测定方法的原理和操作

4、流程；（基础目标）2.了解不同测定方法的优点和局限性，掌握在实际工作中不同测定方法的选择条件；（基础目标）　　3.证明非蛋白组分在蛋白质含量测定中存在干扰，并通过分析实验结果确定该干扰在实际工作中是否可以忽略。（高级目标）　　三、研究策略紧紧围绕中心工作以创建区级文明单位活动为载体切实加强思想道德建设和企业文化建设深入开展群众性的精神文明创建活动今年以来我们在上级党组织的领导和区精神文明办的关心支持指导下坚持以邓小平理论和三个代表重要思想为指导认真落实科学发展观　　本实验最重要的目的是为了确定非蛋白组分在蛋白质含量测

5、定中存在的干扰是否可以忽略。思路有两种：一种方法是先测定纯蛋白质溶液中蛋白质含量，随后在该溶液中加入非蛋白组分（如嘌呤、嘧啶等吸光物质，Ca2+等金属离子，无机酸或无机碱，甚至某些色素等），测定此时蛋白质含量，对比两次测定结果，计算相对误差，从而得出非蛋白组分的影响程度；另一种方法是直接使用天然的蛋白质粗提取物（含有非蛋白组分，并将其中包含的所有非蛋白组分看成一个影响因素），来测定粗提取物中的蛋白质含量。考虑到第一种方法中涉及到的非蛋白组分的加入量没有标准，这些非蛋白材料（影响因素）实验室内也不一定有，更重要的是该实

6、验所具有的实际意义不大，故决定采用第二种方案。但是方案二所存在的一个问题是所测组分蛋白质含量的真实值未知，测得的结果没有可以参考比较的依据，所以需要另外找一个可以参考的标准。　　所采取的策略是先用不同的方法测定已知标准蛋白质溶液的浓度，三个测定值之间会有一定的相关性（或者说测定值之间的变化符合某种趋势），随后测定天然样品蛋白质粗提取液中蛋白含量，得到另外三个测定值，这三个测定值之间同样会存在一定的相关性。如果这两个相关性关系（或者说变化趋势）大致相同，则认为非蛋白组分的影响很小，可以忽略，相反则不能忽略。具体分以下五

7、步走：　　1.分别用紫外法、Folin-酚法、考马斯亮蓝（G-250）法对标准牛血清白蛋白溶液绘制标准曲线；　　2.结合各标准曲线，用三种方法分别测定待测样液1（待测液1A，500μg/mlBSA、待测液1B，250μg/mlBSA、待测液1C，100μg/mlBSA、待测液1D，10μg/mlBSA）各组中蛋白质的含量；　　3.用三种方法分别测定待测样液2（生物样品的蛋白质粗提取液，含非蛋白组分）的蛋白质含量；紧紧围绕中心工作以创建区级文明单位活动为载体切实加强思想道德建设和企业文化建设深入开展群众性的精神文明创建

8、活动今年以来我们在上级党组织的领导和区精神文明办的关心支持指导下坚持以邓小平理论和三个代表重要思想为指导认真落实科学发展观　　4.对比分析在不同稀释倍数下使用各种方法测定的样液1中各组蛋白质的含量值，与真实值相比较并计算相对误差，得出不同测定方法的精确度或者所适宜测定的蛋白质浓度范围；　　5.将不同方法测定的样液1及样液2蛋白质含量值分别绘制成