大肠癌组织中hsp70和p53蛋白的表达及其意义.doc

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1、大肠癌组织中HSP70和p53蛋白的表达及其音7作者：胡文秀，杨成旺，欧阳晓晖，苏秀兰【摘要】目的探讨大肠癌组织中HSP70和p53蛋白的表迗特点及其相互间关系。方法运用SP法结合图像分析，探讨HSP70和p53蛋白在大肠癌组织、癌旁组织及正常组织中的表达。结果在31例大肠癌、癌旁、正常组织标本中，HSP70表达的平均光密度值分别为：士、土、土；癌组织中HSP70的表迗水平显著升高，与癌旁、正常组织中的表达比较差异有统计学意义（P【关键词】大肠癌；热休克蛋白70;P53蛋白；免疫组织化学基金项目：内蒙古自治区人才开发基金资助项目ExpressionandSi

2、gnificanceofHSP70andp53ProtEininHumanColorectalCarcinomaAbstract:ObjectiveToexploretheexpressionfeatureandsignificanceofheatshockprotEIn70andp53proteininhumancolorectalcarcinoma、paratumortissueandnormaltissue.MethodsSPimmunohistochemicaltechniqueandimageanalysiswereused.Results①Ina

3、totalof31cases,theaveragevalueoflightdensityofHSP70were土，土，±andp53proteinswere土，土，土respectiveofHSP70andp53protedshowedasignificaordsHumancolorectly；Ahighexpressioninwerediscoveredanntdifference(PKeywalcarcinoma；HSP70；p53protein；Immunohistochemistry0引言热休克蛋白是细胞受到各种刺激时产生的一类具有重要生理功能和高度

4、保守的多肽类蛋白质分子家族，在应激状态下可被诱导表迗［1］。一些研究表明，HSP70与抑癌基P53的关系密切［2］，但目前尚未见有关HSP70和p53蛋白在大肠癌中表迗的相关报道。本文运用SP法染色，图像分析HSP70和p53蛋白在大肠癌、癌旁及正常组织中的表达，以探讨大肠癌组织中HSP70和p53蛋白的表迗特点及其相互关系。1资料与方法资料收集XX年10月〜XX年9月内蒙古医学院附属医院大肠癌手术切除的病理标本，选择其中诊断明确资料充整的31例。男17例，女14例；结肠15例，直肠16例；年龄30〜79岁；病理类型包括：高分化腺癌6例，高中分化腺癌2例，中

5、分化腺癌11例，中低分化腺癌1例，低分化腺癌1例，粘液腺癌9例，结肠恶性间质瘤1例；发生区域淋巴转移11例；Duke's分期:A期12例，B期7例，C期10例，D期2例；上述标本均于手术切除离体后30min内取样，每例均分别采集肿瘤组织、距癌肿边缘2cm处的癌旁组织、切除肠管一端切缘的正常组织，用10%中性福尔马林液固定，石蜡包埋，连续切片厚4〜5um，常规HE染色及免疫组织化学法染色。主要试剂法兔抗人HSP70（突变型）单克隆抗体，鼠抗人p53单克隆抗体，UltraSensitiveTMSP超敏试剂盒，DAB显色试剂盒，均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

6、染色方法石蜡切片常规脱蜡水化，枸橼酸缓冲液进行抗原热修复超敏免疫组织化学法染色，操作按试剂盒说明书进行；HSP70单抗使用的最佳反应浓度为1:250，p53单抗为即用型；用PBS代替一抗作阴性对照。用新鲜配制的DAB液显色，光镜下观察染色情况，HSP70组为5〜10min，p53蛋白组为lOmin。蒸馏水冲洗3min/次X3，苏木素复染：HSP70组为20min，p53蛋白组为8min;过自来水去掉多余的苏木素，过1%盐酸酒精分化，流动水冲洗lOmin返蓝。切片经过梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片。像采集及分析采用国产JD801图像分析系统，进行图

7、像采集和光密度扫描，得出HSP70和p53蛋白表迗的平均光密度值。统计学处理使用统计分析软件进行统计学处理。多个样本均数间的多重比较，行方差分析F检验；HSP70和p53蛋白表达的相互间关系用直线回归与相关分析。2结果IISP70的表迗特征光镜下HSP70阳性物质为棕黄色颗粒，定位于胞浆和胞核，以胞浆表达为主，见图1。31例大肠癌组织中，HSP70的表迗水平显著升高，与癌旁、正常组织中的表迗比较差异有统计学意义，见表1。P53蛋白在大肠癌组织中的表迗特征光镜下P53蛋白的阳性物质为深棕色颗粒，定位于胞核，见图2。31例大肠癌组织中，p53蛋白的表达水平显著升

8、高，与癌旁、正常组织中的表达比较差异有统计学意义，见