人骨肉瘤中5个新基因片段在不同骨肿瘤中的差异表达

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1、人骨肉瘤中5个新基因片段在不同骨肿瘤中的差异表达摘要:目的筛选数个在人骨肉瘤中检出率高的差异表达基因片段并探讨其临床意义.方法以筛选出的5个新基因片段作为研究对象，采用RT-PCR技术检测37例骨肉瘤、68例其他骨肿瘤及19例截除肢体上的正常骨组织标本.结果在37例骨肉瘤中，表达检出率高的5个片段依次为:ZOL03为92.6%，1C82为89.4%，1C74为73.9%，2G12为66.5%，2A21为53.7%;在23例骨软骨瘤中表达率依次为:ZOL03为6.5%，1C82为14.7%，1C74为8.3%，2G

2、12为11.9%，2A21为12.2%;在29例骨巨细胞瘤中表达率依次为:ZOL03为8.3%，1C82为15.6%，1C74为12.5%，2G12为13.8%，2A21为5.4%;在16例软骨肉瘤中表达率依次为:ZOL03为9.4%，1C82为14.3%，1C74为7.5%，2G12为6.8%，2A21为6.2%;在19例正常骨组织标本中表达率依次为:ZOL03为0，1C82为6.4%，1C74为0，2G12为4.8%，2A21为3.9%;这5个基因片段检出率在骨肉瘤与其他骨肿瘤中存在显著差异（P<0.0

3、1）;其检出率在骨肉瘤与正常骨组织中存在显著差异（P<0.01）.结论ZOL03，1C82，1C74，2G12及2A21这5个基因片段可能与骨肉瘤的发生、发展有关，监测骨组织中此5个基因片段的表达水平的变化可能对骨肉瘤的早期发现更有意义.Keyanosteosarainationratesanddiscussitsclinicalsignificance.METHODSByusingZOL03，1C82，1C74，2G12and2A21asresearchtargets，37specimensofhuman

4、osteosaraand68specimensofothermusculoskeletaltumorsasensensofosteosara，percentagesofthe5fragmentsinationrateensofosteochondroma，percent-agesofthe5fragmentsinationrateensofgiantcelltumorofbone，thepercentagesofthe5fragmentsinturnensofchondrosara，thepercentagesi

5、nsuccessionentsbetusculoskeletaltumorsensofnormalbonetissue，theexpressionratesofthe5frag-mentsentsbetalbonetissueentsofdifferentiallyexpressedgenesisolatedfromhu-manosteosaratissuemaybecorrelatedega公司，PE5700型PCR扩增仪由美国PE公司提供，其他试剂均由第四军医大学全军基因诊断技术研究所提供.　　1.2方法所有

6、标本获取后，立即投入液氮中保存.采用Promega公司PolyATtract○RSystem1000试剂盒快速提取标本组织中的mRNA，经紫外扫描定量后稀释成0.1g・L-1，立即进行mRNA反转录:以oligo（dT）18为起始引物，依次加入无RNase的三蒸水10.4μL，5×Buffer4.0μL，dNTP（250μmol・L-1）1.6μL，mRNA（0.1g・L-1）1.0μL，oligo（dT）18引物2.0μL;反应条件为:65℃5min，37℃60min，

7、75℃5min，MMLV反转录酶（200mU・L-1）在37℃10min时加入.取反转录产物2μL作为模板，依次加入:10×PCRBuffer3μL，2.5mmol・L-1dNTPs3μL，上游引物各1μL（10pmol），下游引物各1μL（10pmol），ddH2O10μL，混合后加入2.5UTaq酶;PCR循环条件为:94℃36s，55℃1min，72℃35s，35个循环，最后在72℃条件下延伸7min.在同一条件下，每次PCR以β-actin作内对照，以克隆质粒作阳性对照.PCR

8、产物进行10g・L-1琼脂糖电泳20min后，在GQS-9600型基因定量分析系统中扫描摄入电泳图像后，对特征性条带进行吸光度扫描［2］，将产物吸光度/对照产物吸光度比值进行成对资料统计学处理.　　2结果　　2.1差异表达基因片段在骨肉瘤中表达在37例骨肉瘤标本中，表达检出率高的5个基因片段依次为:ZOL03的高表达率为92.6%，1C82高表达率为89.4