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1、差异基因表达分析法在胃癌中的应用论文【摘要】［目的］探讨用蛋白质芯片技术筛选胃腺癌患者血清蛋白质表达谱,寻找血清中的标志性蛋白。［方法］采用蛋白质生物芯片表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI）技术,运用SAX2(StrongAnionicExchanger)蛋白质芯片检测胃腺癌患者、胃炎患者和健康者血清,建立诊断模型,然后进行单盲模型验证。［结果］发现5910Da、5084Da和8691Da的三个蛋白质荷比峰(M/Z)在胃腺癌和健康组比较中具有显著性差异。5910Da、6440Da的两个蛋白质荷比峰(M/Z)在
2、胃腺癌和胃炎组中比较具有显著性差异。［结论］建立了胃腺癌的血清蛋白指纹质谱，为以后的胃癌蛋白质组学研究奠定了一定的基础，建立了以5910Da、5084Da、8691Da和6440Da四个蛋白质峰为模型区分胃腺癌与非胃腺癌的血清蛋白表达质谱诊断模型，为胃腺癌的临床诊断提供了一条崭新的途径和方法。【关键词】表面增强激光解析电离-飞行时间质谱蛋白质芯片生物标记胃腺癌ApplicationofSerumProteomicPatternsforDetectionofGastricAdenocarcinomaserumprotei
3、nprofilingofastricadenocarcinomabysurface-enhancedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry(SELDI-TOF-MS)todiscoveringthediscriminaloryproteins.［Methods］Thediagnosismodelofpatientsa,gastricismandhealthypersons,andtestedbysingle-blindmodel.［Results］T
4、hreespecificproteinfingerprintbiomarkersmassedat5910,5084,8691betagroupandcontrolgrouparkersmassedat5910,6440betagroupandgastricismgroupaproteinfingerprintandafoundationforlaterstudyofgastriccancerproteomicsisdeveloped.Thediagnosticmodeloftheproteinprofiling(591
5、0Da,5084Da,8691Da,6440Da)fordistinguishinggastricadenocarcinomafromnon-gastricadenocarcinomaisestablishedtoaidanea.2.InstituteofCellBiology,.freell血清分离管中，4000r/min离心10min。取30μl血清分装在0.5ml离心管中，于-80℃冰箱保存。33例胃腺癌,其中男性22例，女性11例，平均年龄56.5岁(45~71岁)；31例健康志愿者其中男性20例，女性11例，
6、平均年龄63岁(43~70岁)，30例胃炎患者其中男性20例，女性10例，平均年龄58.9岁(46~70岁)。另盲法试验组36例（15例胃腺癌、10例健康志愿者、11例胃炎患者）。1.2仪器和试剂美国赛弗吉公司(CiphergenBiosystems,Inc.)生产的表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SurfaceEnhancedLaserDesorptionIonization?鄄timeOFFlight?鄄MassSpectrometry,SELDI?鄄TOF?鄄MS)及该公司配套的蛋白质芯片SAX2(Stro
7、ngAnionicExchanger,强阴离子交换)芯片。主要试剂：尿素、乙腈、三氟乙酸等均购自Sigma公司，SPA(SinapinicAcid)购自CiphergenBiosystems公司。U9缓冲液(9MUrea,2%CHAPS,1%DTT)，U1缓冲液(用50mMTris?鄄HCl缓冲液，9倍稀释U9缓冲液)，SAX2缓冲液(100mMTris?鄄HClpH9.0)。1.3方法血清样品准备：融解冰冻血清并于4℃离心20000转，10min。每个样品取20μl血清，分别置于1.5ml离心管中。加30μlU9缓冲
8、液于每一试管，于4℃振摇20min，每管加入100μlU1缓冲液，盖严并于4℃震荡30min。芯片平衡：在芯片每个芯池中加入150μl相应的结合/洗脱缓冲液，置于振荡器上，室温孵育5min后除去缓冲液，重复上述操作1次。芯片与蛋白质结合反应：从上述蛋白变性后的血清样品中取50μl样品，加入200μl相应的结合/洗脱缓冲液，使最后上
