BMP-2对人牙周膜细胞成骨和成牙骨质向分化的初步研究

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1、中山大学硕士学位论文BMP-2对人牙周膜细胞成骨和成牙骨质向分化的初步研究PreliminaryInvestigationofBMP-2InfluenceonOsteogenicandCementogenicDifferentiationofHumanPeriodontalLigamentCells专业：口腔临床医学研究生：陈茜导师：唐倩副主任医师答辩委员会主席：答辩委员会委员：广东省科技计划项目2011B031300011中山大学附属第三医院口腔科2015年5月中国广州原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人

2、在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日BMP-2对人牙周膜细胞成骨和成牙骨质向分化的初步研究专业：口腔临床医学硕士生：陈茜导师：唐倩副主任医师摘要目的本研究拟通过体外实验比较不同BMP-2浓度对人牙周膜细胞向成牙骨质和成骨质方向分化差异的影响，来探讨BMP-2影响人牙周膜细胞分化的机制。同时，

3、研究BMP-2与细胞的作用时间和分化的关系，以及是否存在最佳刺激时程。从而为牙周组织再生治疗中BMP-2的临床应用提供理论依据。方法1.hPDLCs的培养：采用组织块培养法培养原代hPDLCs，观察细胞形态并绘制生长曲线。2.hPDLCs的鉴定：采用流式细胞仪分析目标细胞表型；免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源。3.hPDLCs增殖能力的研究：采用流式细胞仪分析细胞周期的变化。4.hPDLCs成牙骨质分化的研究：采用荧光定量PCR检测BMP-2处理后hPDLCs中CAPmRN表达水平上的改变；利用Westernblot检测

4、BMP-2处理后hPDLCs中CAP、CP-23蛋白水平的变化。5.hPDLCs成骨分化的研究：采用荧光定量PCR检测BMP-2处理后hPDLCs中RUNX2和COL-1mRNA表达水平上的改变；利用Westernblot检测BMP-2处理后hPDLCs中EGFR和COL-1蛋白水平的变化。结果1.所培养的hPDLCs具有细胞干性，增殖能力强，生长活性好。2.BMP-2对hPDLCs增殖能力的影响：流式细胞周期的结果显示，92.31%的细胞在静止期和DNA合成前期（G0/G1期）。3.BMP-2对hPDLCs成牙骨质向

5、分化能力的影响：1)荧光定量PCR结果发现，20ng/mlBMP-2作用下，CAPmRNA表达量明显增高，在第5天达到峰值，差异有统计学意义（p<0.05）；2)Westernblot结果显示，20ng/ml和100ng/mlBMP-2作用下hPDLCs中CAP和CP-23表达量相对较高，差异有统计学意义（p<0.05）。4.BMP-2对hPDLCs成骨向分化能力的影响：1)荧光定量PCR结果发现，80ng/mlBMP-2作用下，COL-1mRNA表达量明显增高，在第7天达到峰值，差异有统计学意义（p<0.05）；10

6、0ng/mlBMP-2作用下，RUNX2mRNA表达量明显增高，随时间逐渐升高，差异有统计学意义（p<0.05）；2)Westernblot结果显示，100ng/ml的BMP-2作用下，EGFR和COL-1表达量明显上升，差异有统计学意义(p<0.01)。结论1.BMP-2对hPDLCs成牙骨质和成骨方向分化具有上调作用。BMP-2在低浓度（20ng/ml）时促进hPDLCs向成牙骨质方向分化，BMP-2在较高浓度（100ng/ml）作用下促进了成骨方向的分化。2.BMP-2刺激的时间对hPDLCs的影响也具有统计学意

7、义（p<0.05），存在最佳刺激时程。成牙骨质分化在第5天达到峰值，成骨方向分化在第7天达到峰值。这对临床确定BMP-2的疗程是有价值的。关键词：人牙周膜细胞；BMP-2；分化IIPreliminaryInvestigationofBMP-2InfluenceonOsteogenicandCementogenicDifferentiationofHumanPeriodontalLigamentCellsMajor:StomatologyCandidate:ChenXiSupervisor:Assoc.Prof.Tang

8、QianABSTRACTObjective：TheinfluenceofdifferentconcentrationsofBMP-2onosteogenicandcementogenicdifferentiationofhumanperiodontalligamentcellsisexperimentallyinvestigate