粪便培养标准操作程序

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1、月亮县中医院项目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_15页码：第-3-页，共3页检验科临床微生物项目SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101SOP_15-10粪便培养标准操作程序一、粪便培养标本采集和运送见本手册《病原微生物标本的采集运送和处原则》。二、标本验收1.申请单验收：要求申请单除患者的基本信息以外还应包括标本收集时间、收集方式、是否已使用抗生素等，验收时应检查申请单是否填写完整。2.标本验收：（1）检查标本标识是否与申请单相符；（2）检查送检时间是否超过规定的标本保存时间。3.不合格标本处理：（1）对申请单信息不全者应设法与临床医师取得联

2、系；（2）对标识不符、送检容器不合格，送检时间超过规定时间的标本应注明原因，退回，要求重新留取标本，并做记录。三、实验室检查1、涂片检查当检查霍乱弧菌以及菌群失调优势菌时需作直接涂片检查。（1）检查霍乱弧菌落染色检查：取新鲜送检标本涂片，干燥后革兰氏染色，油镜下观察有无革兰阴性呈鱼群排列的弧菌。悬液检查：取患者粪便，制成悬滴标本，检查细菌的动力，霍乱弧菌呈穿梭状活泼的运动，在悬滴涂下加O1群霍乱弧菌诊断血清后，在显微镜下观察，若原运动的现象停止，为制动试验阳性。可初步推断为疑似O1群霍乱弧菌。（2）酵母菌涂片检查：涂片染色在油镜下观察，是否有卵形的芽生孢子及假菌丝，即报

3、告检出酵母样菌。（3）粪便中优势菌：涂片革兰氏染色油镜下观察：染色性、细菌形态、排列、各自在涂下中所见到的相对比例、推定主要优势菌，并及时报告结果。2、培养及结果观察（1）沙门-志贺菌：接种SS（或HE）及MAC（或中国兰），35℃、18-24h后检查平板，如未发现沙门菌或志贺菌的可疑菌落，48h重复检查一次。如未发现可疑菌落，可报告:“未检出沙门/志贺菌”；如有疑似菌落，做推断性生化试验，初步生化反应符合两属生物学定义，并与志贺菌诊断血清中之一发生明显凝集者，可报告“检出**志贺菌”编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时间：20180101时间：20180101

4、时间：20180101月亮县中医院项目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_15页码：第-3-页，共3页检验科临床微生物项目SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101；与沙门菌多价及群因子诊断血清凝集者，只能报告“检出*群沙门菌”。沙门/志贺菌的选择性增菌培养基，此类培养能抑制革兰阳性菌及暂时性抑制大肠埃希氏菌和变形杆菌生长，并促进沙门/志贺菌的生长。（2）霍乱弧菌培养：取疑似患者粪便接种于碱性胨水中，进行增菌，同时划线接种4号琼脂/TCBS平板及血平板，孵育于35℃。增菌培养6h后，取表面菌膜移种于上述平板，进行分离培养，并同时作涂片，悬滴标本，检查

5、形态及活力。各种分离培养的平板在孵育18-24h后观察菌落，挑取可疑菌落，先与生理盐水混匀，观察有无自凝现象。用O1和O139群霍乱多价血清作玻片凝集试验，立即出现明显凝集的为阳性。如在选择性培养其上生长典型，活动活泼呈穿梭状，氧化酶阳性的革兰阴性弧菌并且霍乱多价血清凝集者，可判定这O1/0139群霍乱弧菌。在霍乱流行期间即5-10月，根据并结合临床即可对病人作出霍乱病的早期诊断。关立即向当地疾控部门报告信息。（3）副溶血性弧菌培养：取粪便接种于弧菌增菌液中，同时划线分离弧菌的选择性培养基和SS平板上，35℃孵育18-24h后，观察菌落。生长在弧菌培养基上的菌落特性:直

6、径1-2.5mm，微隆起，混浊，无黏性，无色，湿润，菌落中心灰暗绿色较深；在SS平板上的菌落直径为1-2mm，扁平，中间隆起如蜡滴，无色透明，菌落黏稠，往往不易挑起。挑选菌落移种于含盐的KIA、MIU有作无盐、高盐试验，进行鉴定。（4）致病性大肠埃希菌的培养：包括产肠毒素性大肠埃希菌（ETEC）、致病性大肠埃希菌（EPEC）、侵袭性大肠埃希菌（EIEC）、出血性大肠埃希菌（EHEC）。取液体状、脓血、糊状粪便或肛拭子划线接种于：麦康凯等弱选择性培养基；大肠埃希菌了发酵乳糖，在MAC上呈桃红色不透明菌落。山梨醇麦康凯，肠出血性大肠埃希菌及某些肠致病性大肠埃希菌迟缓发酵山梨

7、醇。血平板，用于观察肠致病性大埃希菌的溶血及与其他菌落的鉴别。标本接种培养基后，37℃培养18-24h观察结果。初步鉴定：挑取可疑菌落作生化及大肠埃希菌多价血清作玻片凝集试验，阳性者作进一步鉴定。（5）疑似葡萄球菌培养：取绿色、海水样或糊状粪便划线，接种于甘露醇高盐平板或血平板，35℃孵育过夜，观察菌落。挑取菌落涂片，革兰染色，镜检。如见革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，则需做凝固酶、DNA酶及甘露醇发酵等试验加以鉴定。（6）真菌培养：真菌性腹泻多继发于抗生素治疗后，常见有白色念珠菌，光滑念珠拉菌。将标本接种于含氯霉素的沙氏琼脂及血平板，置25