肌细胞生长因子mef2a真核表达载体的构建

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1、姓名刘纪坤学号11141011040院系生命科学技术学院专业_生物技术年级2011级指导教师孙寅玮2014年11月22日填表说明1.原则上应于最后一学年第一学期完成毕业论文（设计）的开题工作。2.学生填写此表后，经指导教师同意，由指导教师小组集中进行开题审查，不合格者应重新修改，直至合格后方可开题。3.学生应执行本表撰写毕业论文（设计），不得作实质性改变。学生须在所在院（系）规定的吋间内完成毕业论文（设计）并参加答辩。4.毕业论文（设计）的具体要求请参阅《新乡学院毕业论文（设计）工作条例》和《新乡学院毕业论文（设计）写作与排版打印规范》。5.本表可到教务处网站下载，正

2、反双面、黑白打印，屮文内容用宋体、小四号字，英文内容用TimesNewRoman、小四号字；指导教师意见处应手写。封面上的姓名、学号、院系、专业、年级、指导教师等填写内容相对横线居中。日期填写阿拉伯数字，数字与“年”、“月”、“日”之间没有空格，完成后，日期整体位置应保持原样。6.木表敁后装入学生毕业论文（设计）专用档案袋。拟选肌细胞生长因子MEF2A真核表达载体的构建题目选题依据及研究意义动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是严重威胁人炎健康的'5V见病和多发俩。其发病机制如下：在正常的血管壁屮，平滑肌细胞位于管壁中层，维持血管壁张力，改变官腔大小以

3、调节机体或脏器的血流量。当血管损伤时，内皮细胞、争核细胞、巨噬细胞等聚集，并释放各类生长冈子，使得位于屮膜的平滑肌细胞发生表型转化，即由收缩型转化为合成型，向内膜移行增殖，最终形成动脉粥样硬化板块。由此可见，血管平滑肌细胞(Vascularsmoothmusclecell,VSMC)的表型转化、增殖、迁移是动脉粥样硬化发病的关键因素。肌细胞增强网子2(Myocyteenhancer-bindingfactor2,MEF2)是一类DNA结合蛋白，属于MADS超家族成员，在脊椎动物屮其家族成员包括MEF2A,MEF2B,MEF2C,MEF2D四种转录因子。MEF2以同源或

4、异源二聚体形式发挥作用，其蛋白多结合在许多肌特异性基因的调控区域控制转录过程。研究发现，MEF2Ajt•结合位点广泛存在于肌肉、内皮的特异性基因调控区，MEF2蛋白在心血管系统、呼吸系统、淋巴免疫系统、脂肪组织、A皮组织和肌陶组织中都冇表达，且在基因表达调控、细胞分化、增殖、细胞形态学、生存和凋亡等多个方面发挥着重耍的作用。因此，MEF2A冇调控VSMCs表型转化、介导细胞分化、调控VSMC增殖的作用。但针对MEF2A的研究A前还处亍初级阶段，在细胞表型转化、增殖和迁移屮相关分子机制存在很多空白，MEF2A对动脉粥样硬化的影响的具体环节和作用机制尚不清楚。另一方面，M

5、EF2蛋0本身的表达和活性变化受到相关因子和通路的调控。MEF2A的表达和激活受多种W素调$，其蛋白可调控动脉粥样硬化相关凶子的表达，MEF2A依赖不M信号通路参与信号转导与分子调节。然而其相关的分子机制，尤艽是核内信号定位等方面仍需要进一步的研究。本实验利用RT-PCR和分子克隆技术对小鼠肌细胞生长W子MEF2A基W进行克隆，构建MEF2A真核表达载体，为进一步研究肌细胞生L<:因子MEF2A在血管平滑肌细胞表型转化、增殖过程屮的分子机制奠定实验基础。选题的研究现状动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是严重威胁人炎健康的'5V见病和多发病，是发达国家

6、人口死亡的主要原因，在我国的死亡率也呈逐年增高的趋势。苏发病机制如下：在正常的血管壁屮，平滑肌细胞位于管壁屮层，维持血管壁张力,改变官腔大小以调节机体或脏器的血流量。当血管损伤吋，内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞等聚集，并释放各类生K因子，使得位于中膜的平滑肌细胞发生表型转化，即由收缩型转化为合成型，向内膜移行增殖，最终形成动脉粥样硬化板块［1］。动脉粥样硬化的致病因索复杂，包括高血压、高血脂、肥胖、吸烟等环境因素以及易感基因作用都会引起AS和冠状动脉粥样硬化性心脏祸(Coronaryarteryheartdisease,CHD)的发侦［2］。近年来诸多研究主耍集中于动脉

7、粥样硬化的发生和发展中，脂质沉积、炎症反应l3j、细胞增殖迁移等的作用，但对动脉粥样硬化的致病基因有待深入研究。动脉粥样硬化基因背景异常复杂，相关致病或易感基因众多，芄调控机制尚不明确。Mef2a作为首个被报道的CHD致病基W［41，为研究AS和CHD提供了新的思路。研究表明，肌细胞增强因子MEF2在多种细胞的信号传导，激活遗传程序、控制细胞分化、增殖、细胞形态学、生存和凋亡等方而发挥着重要的作用

8、5’61。肌细胞塘强因了^Onyocyteenhancer-bindingfactor2，MEF2)属丁•MADS超家族成员。在脊椎动物屮其家族成员包括M