细胞型朊蛋白（prpc）受体或受体源的筛选

《细胞型朊蛋白（prpc）受体或受体源的筛选》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、细胞型朊蛋白（PrPc）受体或受体源的筛选【关键词】细胞型朊蛋白关键词:细胞型朊蛋白;受体，细胞型朊蛋白;细胞粘附分子;小脑颗粒细胞摘要:目的本研究表达了细胞型朊蛋白（PrPc）和碱性磷酸酶（AP）的融合蛋白（PrPAP），并以此融合蛋白作为配体通过结合实验寻找PrPc的受体（或结合蛋白）.方法以碱性磷酸酶组织化学法检测表达PrPAP的细胞培养液与细胞表达的细胞粘附分子、少突胶质细胞和雪旺氏细胞系以及原代培养的小脑颗粒细胞的结合，并以含AP的细胞培养液作对照，阳性对照为KitAP及其细胞表面表达受体的结合.结果在所表达的细胞粘附分子中，NCAM14

2、0有疑似结合，其他L1，CHL1，P0，Tag，F3及PrP未见与朊蛋白的阳性结合;约有20%呈现雪旺氏细胞阳性结合，少突胶质细胞阳性结合率约为60%;原代培养的小脑颗粒细胞与朊蛋白有几乎100%的阳性结合，并且细胞密度高.AP对照仅有微弱染色.结论推测朊蛋白的功能作用方式为异嗜性结合;确定原代培养小脑颗粒细胞为进一步分离提纯朊蛋白受体的起始材料，并提示小脑和朊蛋白功能及朊蛋白疾病的可能相关性.　　Keyolecule;cerebellargra-nuleneurons　　Abstract:AIMToexpress，arebinantprotein

3、PrPAPcontainingtheextracellularpartofprionproteinandalkalinephosphatase（AP）inasecretedformintheculturesuper-natant.andtouseitasaligandtosearchforreceptors（orbindingproteins）forprionproteinthroughbindingassay.METHODSAPhistochemistryolecules，culturedoligodendrocytesandScharycul-

4、turedcerebellargranuleneurons.TheculturesupernatantcontainingAPongthecelladhesionmoleculesde-tected，onlyNCAM140shobiguouspositivebinding，theothermoleculesL1，CHL1，P0，Tag，F3andPrPhadnobindingately20%positivebinding，thebindingrateforoligoden-drocytesaryculturedcerebel-largranulen

5、euronshadalmost100%cellsbindingaterialforthefurtherseparationofreceptorsforprionprotein.It’simpliedthatcerebellummighthaveacloserelationshipine（LifeTechnolo-gies，Germany），细胞培养液成分（LifeTechnolo-gies，Germany），PrP抗体（Charles（120，140，180），P0，PrP（德国汉堡大学分子神经生物研究所提供）;④动物:C57BL/6J野生型小鼠（

6、德国汉堡大学分子神经生物研究所动物中心提供）.　　1.2方法①表达PrPAP和AP:以Lipofec-tamine转染PrPAP质粒至293-EBNA细胞中，48h后，收集细胞培养液，同时培养表达碱性磷酸酶（AP）的细胞并收集培养液，以ELISA法检测PrP和AP活性;②粘附分子的表达:同样以Lipofectamine分别将L1，CHL1转染到L929细胞中，F3，Tag转染到CHO细胞中，NCAM（120，140，180），P0，PrP至COS-1细胞中，并且以略去相应DNA的模拟转染细胞作为对照;③细胞系的培养:少突胶质细胞系OLN-93以DM

7、EM，100mL・L-1FCS，5×103U・L-1青霉素和50mg・L-1链霉素培养液37℃，50mol・L1CO2孵育箱内培养至细胞80%铺满.雪旺氏细胞系S16以DMEM，100mL・L-1FCS，50mg・L-1庆大霉素培养液37℃，50mol・L-1CO2孵育箱内培养至细胞80%铺满;④原代小脑颗粒细胞培养:小脑颗粒细胞培养自6～8d的C57BL/6J野生型小鼠小脑，方法依据文献［2］，细胞重悬和培养于无血清培养液加1g・L-1

8、BSA，2.2g・L-1NaH-CO3，100mg・L-1Na2CO3，27IU・