反式头孢丙烯的酶法合成及其体外抗菌活性

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1、反式头孢丙烯的酶法合成及其体外抗菌活性冯胜昔梁世中龟山丰【关键词】,反式头孢丙烯；,,酶法合成；,,7　　摘要：以7苯乙酰氨基3E丙烯基3头孢菌素4羧酸(反式GPRA)为原料，在青霉素酰化酶作用下，首先酶法水解得到3E丙烯基3头孢菌素4羧酸(反式APRA)，过滤固相酶，滤液调pH分离得到反式APRA固体；在青霉素酰化酶作用下，反式APRA再与对羟基苯甘氨酸乙二醇酯缩合，得到反式头孢丙烯；酶法合成所得的产品与进口反式头孢丙烯对照品一致。初步体外抗菌试验表明，反式头孢丙烯对金葡菌和大肠埃希菌的体外抗菌活性比临床用头孢丙烯(顺式

2、900%，反式9%)弱。　　关键词：反式头孢丙烯；酶法合成；7苯乙酰氨基3E丙烯基3头孢菌素4羧酸(反式GPRA)；7氨基3E丙烯基3头孢菌素4羧酸(反式APRA)；青霉素酰化酶(IPA750)；抗菌活性　　Enzymaticsynthesisandinvitroantibacterialactivityoftranscefprozil　　ABSTRACTImmobilizedpenicillinacylase(fromE.coli)ido3Epropenylcephalosporanicacid(transGPRA)hy

3、drolyzationinto7amino3Epropenylcephalosporanicacid(transAPRA).Then,transAPRAaticsynthesis;PenicillinGacylase;7Phenylacetamido3Epropenylcephalosporanicacid(transGPRA);7amino3Epropenylcephalosporanicacid(transAPRA);Antibacterialactivity　　头孢丙烯(cefprozil，曾称头孢罗齐)是Brist

4、olMyers公司研究开发的非酯型口服头孢菌素〔1〕，1992年以Cefzil的商品名在美国首次上市，是美国FDA批准的第一个可用于治疗儿童中耳炎和鼻窦炎的口服头孢菌素类抗生素，杀菌机制是阻碍细菌细胞壁合成，安全性好，不良反应极低。头孢丙烯具备以下几个特点：①属第二代头孢菌素类抗生素，抗菌谱广并较均衡，抗菌活性强，对β内酰胺酶具有较好的稳定性；②吸收迅速，生物利用度高达94%；③治疗呼吸道感染和皮肤软组织感染疗效均达90%以上；④每日仅需口服1～2次，方便；⑤药物吸收不受食物的影响。头孢丙烯已收载在美国药典中，为美国临床医

5、生推荐的品种之一。由于头孢丙烯C3位连接的是丙烯基，故该化合物存在两个几何异构体，一个为顺式头孢丙烯，一个为反式头孢丙烯，临床上使用的是混合体，美国药典〔2〕明确规定临床用的头孢丙烯，顺式含量89%～94%，反式含量为6%～11%，测定方法为外标法。文献〔3〕报道顺式头孢丙烯的抗菌活性，对金葡菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等有效。Natto等〔4〕报道，以7氨基3氯甲基3头孢菌素4羧酸二苯甲酯为起始原料，通过缩合、碘代、R(D2O/Na2CO3)δ190(3H，dd，J=70，10)；376(2H，d，J=70)

6、；511(1H，d，J=45)；533，(1H，d，J=50)；643(1H，dd，J=160，70)；700(1H，dd，J=155，15)。　　2.3反式头孢丙烯的制备将90ml蒸馏水加至三口瓶中，加入对羟基苯甘氨酸乙二醇酯(535g，250mmol)，搅拌，调温10℃，滴加氨水调物料pH至80，加入反式APRA(15g，625mmol)，搅拌至溶清，滴加3mol/LHCl调pH至65，量物料体积，加入适量水调物料总体积为100ml，调温15℃，加入IPA750固定化酶(30g)，滴加氨水维持物料pH至65，定时从反应

7、液中取样，离心(12000r/min，5min)，取上清液测试含量。反应40min，HPLC测试反式头孢丙烯生成率953%，即刻过滤，用10ml蒸馏水洗涤固相酶，合并滤液，过HP20柱，用水洗脱，含有反式头孢丙烯洗脱液冷冻干燥，得到反式头孢丙烯(144g)，分离收率593%，纯度976%，1HNMR(D2O)δ179(3H，dd，J=70，15Hz)；350(2H，s)；509(1H，d，J=40Hz)；513(1H，s)；563(1H，d，J=40Hz)；616(1H，dd，J=70，150Hz)；672(1H，dd，J

8、=15，15Hz)；694(2H，d，J=65Hz)；735(2H，d，J=65Hz)，与进口反式头孢丙烯对照品一致。　　2.4反式头孢丙烯抗菌试验抗菌活性采用滤纸片扩散法测定。试验菌为金葡菌ATCC6538和大肠埃希菌ATCC8739。供试化合物反式头孢丙烯和对照品临床用头孢丙烯(顺式91%，反式9%