细胞增殖活性测定技术及其在肿瘤研究和诊断中的应用课件

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1、细胞增殖活性测定技术及其在肿瘤研究和诊断中的应用病理学教研室刘钧E-mail:nc-lj02@163.comTel:15983775502,2317449电子显微术、免疫组织化学、原位杂交技术、原位PCR技术、图像分析技术、激光扫描共聚焦显微术、组织芯片技术、细胞增殖活性测定的技术。现代病理形态学新技术：第一节细胞周期(cellcycle)一、概念指连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到本次有丝分裂完成所经历的整个过程。重要物质准备：DNA复制，并将其平均分配到两个子代细胞中。二、细胞周期四个时期细胞形态有丝分裂期(mitosisphase)分裂间期(int

2、erphasephase)分裂间期是细胞增殖的物质准备和积累阶段；分裂期则是细胞增殖的实施过程。G1期：合成DNA所需的前体物质、能量和酶类S期：DNA的复制及组蛋白、非组蛋白等染色体蛋白的合成G2期：DNA复制完成，合成RNA和微管蛋白等M期：细胞在M期进行分裂四个时期Prizecitation:"fortheirdiscoveriesofkeyregulatorsofthecellcycle"TheNobelPrizeinPhysiologyorMedicine2001LelandHartwell,born1939.FredHutchinsonCan

3、cerResearchCenter,Seattle,WA,USA.PaulNurse,born1949.ImperialCancerResearchFund,Lincoln'sInnFields,London,UK.TimHunt,born1943.ImperialCancerResearchFund,ClareHallLaboratories,SouthMimms,UK.LelandHartwellPaulNurseTimHunt发现了一类细胞周期调控基因而获此殊荣（checkpoint）首次鉴定、克隆出细胞周期的关键调控子之CDK分子。第一个

4、发现了周期素(cyclin)，三位学者对细胞周期研究的主要贡献周期中细胞(cyclingcell)：静止期细胞(quiescentcell)：Go期细胞Cellcycle三、细胞周期的特点1、单向性：沿G1→S→G2→M2、阶段性：3、时相交界处存在checkpoint；4、细胞周期的顺利推进与胞外信号等密切相关。三个重要的控制点(controlpoint)，即G1控制点，S控制点和M控制点。(一)G1控制点:四、细胞周期的控制点G1期S期→细胞增殖周期G0期，多数专一化，分化能力↓在G1期的后期中存在一个类似于酵母周期中起始点的限制点(restricti

5、onpoint，简称R点)，它在细胞的每一次分裂中具有控制作用，故称为G1控制点，只有通过R点的细胞才能进入S-G2-M期。在通过R点前必须合成一种不稳定的蛋白质(p105RB)，当它积累到一定量时才能通过R点而启动DNA合成。故细胞有1、继续增殖细胞。2、暂时不增殖细胞。3、不增殖细胞G1期后，细胞质中含有DNA复制的激活因子，叫S期激活因子(Sphaseactivator)。其量决定Gl期完成和细胞进入S期的速度。(二)S控制点细胞开始有丝分裂时需要M期激酶(Mphasekinase)激活。M期激酶组成(三)M期控制点催化亚单位p34调节亚单位：一种细

6、胞周期蛋白(cyclin)，有A、B五、细胞周期调节与疾病（一）恶性肿瘤1、肿瘤细胞周期并无缩短2、G0期细胞少—倍增时间缩短3、子细胞立即进入周期并失去控制4、瘤细胞由单个干细胞（可能即G0）按对数增加，肿瘤为基因病肝癌—cyclinA基因高表达乳腺癌cyclinA、B、D1、E↑食道鳞癌P16蛋白（CDK4，CDK6抑制物）缺失（二）AIDSHIV——CD4机理：CD4细胞的CDC2上的酪氨酸残基过分磷酸化而失活，并使cyclinB积聚（CDC2由G2期进入M期的主要激酶），因而：CD4细胞周期停滞于G2期—凋亡六、肿瘤细胞周期与用药（一）分类1、细胞

7、周期非特异性药氮芥2、细胞周期特异性药环磷酰氨（二）用药时间与周期：用药时间一般相当瘤细胞1、2个周期第二节细胞增殖测定技术一、细胞增殖（cellproliferation）（一）概念：细胞通过生长和分裂获得和母细胞一样遗传特性的子细胞，使细胞数目成倍增加的过程。是机体的基本生物学特征。（二）方式无丝分裂：低等生物、高等少、细胞培养有丝分裂减数分裂（三）细胞增殖的分子机制增殖：细胞损伤—释放生长因子—同类细胞或同胚层细胞增生损伤细胞—生长因子—受体（膜）———核————————DNA合成——分裂——子细胞凋亡转录（精确或修复）信息传导影响增殖的分子机制1、

8、生长因子（growthfactor)生长因子通过与其相应的受体结合