葡萄茎段再生体系建立

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1、葡萄茎段再生体系的建立葡萄茎段再生体系的建立［园艺特产］古丽给娜.买斯古提　　约2612字　　0　引言　　植物组织培养是指在无菌条件下。将离体的植物器官、组织、细胞或原生质体培养在人工配制的培养基上。人为控制培养条件，使其生长、分化、增殖，发育成完整植株或生产次生代谢物质的过程和技术。用组织培养法繁衍葡萄，是工厂化育苗和脱毒苗木快速繁衍的重要办法。可以缩短苗木繁衍周期。加快新品种推广应用。　　1　葡萄组织培养对实验室及设备的要求　　1.1　化学实验室　　主要承担配制培养基的任务。要求具有各种化学药品试剂、各种玻璃器皿、称量天平等。　　1.2　洗涤室

2、　　主要进行玻璃器皿的洗涤，要求有蒸馏水装置，同时有烘箱，以便洗后烘干。　　1.3　灭菌室　　主要进行培养基和用具的消毒。要有高压灭菌锅，具有水源和电源。　　1.4　接种室　　接种室是消毒接种和转移的场所。要求密闭、清洁、整齐、装有紫外灯，能随时灭菌。则配制接种箱或超净工作台。　　1.5　培养室　　培养室是葡萄苗培养生长的地方。要求清洁，保温好，室温均匀一致，并有绝热、防火性能。　　2　培养基的配制　　2.1　母液的配制　　2.1.1　大量元素　　称取硝酸钾19g，硫酸铵16.50g，硫酸镁3.70g，磷酸二氢钾1.70g和氯化钙3，32g加蒸馏水

3、溶解使其总量达1L。　　2.1.2　微量元素　　称取硫酸锰2.23g，硫酸锌0.86g。硼酸0.62g，碘化钾0.083g加蒸馏水溶解，再加250mL，硫酸铜25uL，氯化钴25uL加蒸馏水溶解使其总量达1L。　　2.1.3　铁盐　　称取硫酸亚铁2.78g，乙胺四乙酸二钠3.73g溶于1L蒸馏水中配成。　　2.1.4　维生素的配制　　甘氨酸：称取0.5g氨基乙酸溶于50mL的蒸馏水中配成。　　盐酸硫胺素(V_B1)；称取0.05g盐酸硫胺(维生素B₁)溶于50mL的蒸馏水中配成。　　盐酸吡哆醇(V

4、B6)：称取0.05g维生B₆溶于50mL的蒸馏水中配成。　　盐酸：称取0.05g烟酸溶于s0mL的蒸馏水中配成。　　2.1.5　植物激素(IBA)　　称取0.05g吲哚丁酸溶于50mL的蒸馏水中配成。把混合液(母液)或单独配制的药品，均应放入冰箱中保存，以免变质，长霉。蔗糖、琼脂可按配方要求，随称随用。　　2.2　配制培养基的具体操作　　目前，葡萄组织培养中应用最多的为MS培养基。　　配制6LMS培养基时，首先称取蔗糖120g、琼脂42g、肌醇0.6g放入锅里，加2L自来水加热。加热时，不断搅拌，十几分钟后琼脂溶

5、解。培养基呈透明状。　　取500mL量筒，加人配制好的大量元素300mL，微量元素60mL，铁盐60mL，甘氨酸1200微升，盐酸硫胺素(vm)2400微升。盐酸吡哆醇(V_B9)3000微升。盐酸3000微升和IBA600微升倒入锅里，再加蒸馏水至6L，不断搅拌，然后再加碳素9g，使培养基混合均匀。　　用PH试纸测试PH。用氢氧化钠或盐酸将培养基PH调至为6.5。　　将配好的培养基分装到提前准备好的试管或三角瓶内，盖好瓶盖。培养基要经消毒锅高压灭菌。冷却后放到培养室预培养3d，如没有杂菌污染，才可进行接种。　　3　葡萄外植体的

6、选择和灭菌　　3.1　葡萄外植体的选择　　材料取自新疆维吾尔自治区葡萄瓜果开发研究中心资源圃，采集在前3d无雨的晴天上午进行，应剪取上部嫩枝，每个品种剪嫩枝3～4个，绑在一起，挂牌写上品种。用报纸或纱布包裹。带回实验室。　　3.2　葡萄外檀体的灭菌　　(1)将采集的样品剪除大叶片，留下叶柄，把茎段剪至5～6cm小块放人灭菌过的广口瓶中。瓶子上注明葡萄品种。　　(2)先把瓶子中的茎段用自来水冲洗3～5次，然后用75％酒精冲洗1次。最后倒入无菌水冲洗1次带进接种室。　　(3)进接种室后，瓶中加入1％升汞浸没材料6～8min，除去升汞水溶液，再用灭菌水冲

7、洗3次。　　4　葡萄组织培养　　4.1　初代培养和操作　　(1)接种前必须把接种室和超净工作台的紫外灯开15min，通风25min。　　(2)穿好工作服，戴上工作帽，用洁净的水洗手，再用75％的酒精棉球擦手消毒。　　(3)点燃酒精灯，将曲剪刀、枪状镊子浸入75％酒精中，用时取出在火焰上烧15～30s，冷却备用。　　(4)把瓶子放入超净工作台里，把瓶子里面的茎段倒入灭菌好的培养皿里。用烧过的剪刀剪去受伤端面，剪成单芽茎段，接人培养基中。每瓶插3个单芽茎段。瓶上写上葡萄品种。然后放到培养室培养，1周后检查是否污染。如果发现污染。重做。　　4.2　葡萄的

8、继代繁衍和操作　　对初代培养合格的苗，通常采取MS培养基继代繁殖。　　(1)穿好工作服，戴上工作帽，用洁净的水洗手，再用7