茎用芥菜不同再生体系的建立及遗传稳定性分析

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1、浙江大学硕士学位论文茎用芥菜不同再生体系的建立及遗传稳定性分析姓名：徐春霞申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：陈利萍20050601分类号：一UDC：——密级：——单位代码：!鳗31编码：——学号：2Q21§Q5Q茎用芥菜不同再生体系的建立及遗传稳定性分析论文答辩日期：2堡!堡生宣!!g答辩委员会主席：j鲤遽么垒豳宝氩答辩委员会成员：述丝立杰蛆塞．经亟．整燃亟煌垂盔喧遮菌坌l彝!圭燃论文评阅人：煎：!j磊邋趟!塑麴鍪基监盔碰垒致谢时光荏苒，三年转眼即将逝去。在这三年的硕士研究生学习阶段，有幸得到导师陈利萍副教授的细心指导。

2、从实验的设计、时间安排、实验的操作以及后来的实验结果分析、论文的撰写等方方面面都对我悉心指导。特别是研一刚进实验室的那段时间，陈老师更是对我的每一步基本操作都作示范和指导，从而使我养成了良好的实验习惯，掌握了规范的实验操作技能，为以后实验的顺利开展奠定了基础。当我在原生质体分离和培养实验中遇到困难时，不仅多方面地帮我分析原因，更是不时地鼓励我，使我能够不断地坚持下去。虽然，最后还是以失败告终。但我从中学到了一门新的技术，并学会了如何思考、解决问题，这更是一种笔宝贵的财富。在换了课题之后，陈老师不断为我的实验出谋划策，时刻关心我

3、的实验进展。最终使我得以及时完成论文有关的所有实验。陈老师在指导实验的同时，在论文写作上也不时给我指正，使我的写作水平不断提高。同时，在生活上给予我无微不至的关怀，为人处事上给予我谆谆教导，让我受益非浅。张明方教授也在实验、学习及生活上给予我许多宝贵的意见及热心地照顾。在此，向两位老师表示最诚挚的谢意!同时也要感谢曹家树、喻景权等领导的关怀和照顾!在研究生的学习期间，特别要感谢我的搭档一李春顺同学。他不仅在实验上给我提出了许多建设性的意见，还让我学到了许多有关分子方面的知识。同时，在学习及生活上也给了我极大的帮助。另外，也十分

4、感谢同级的付杰、闫静、张艳、孟秋锋等同学的愉快合作和杨景华师兄在实验方面的细心指导，以及葛亚明、王艳菊、朱雪云、齐晓华、扬国志、许智颖、张硕、缑艳霞等师弟师妹们的大力帮助和关心。也感谢张献英老师和金亮同学在有关流式细胞仪实验方面的细心帮助。还有好友李水凤、张岚岚等，室友陈娇、于承艳在生活、学习上给我的关心和帮助。我还要衷心感谢我的爸爸、妈妈、妹妹和舅舅等亲人一直以来对我的支持和爱护，不断地给我鼓励，让我充满自信地克服一个个困难。最后，再次感谢所有关心过我、帮助过我的亲人、朋友、老师和同学。祝愿他们一切顺利!徐春霞2005年6月

5、于华家池摘要茎用芥菜(Brassciarjunceavat．tsatsai)包括抱予芥，笋子芥和茎瘤芥(BrassicajunceaCoss．vat．tumidaTsenetLeel三_个变种，是我国的一类特色蔬菜，其中茎瘤芥的加工产品——榨菜，是世界著名的腌菜之一。通过不同再生途径建立高效稳定的再生体系是进行茎瘤芥基础理论和实际应用等研究的必要条件之一。组织培养再生植株的遗传稳定性分析又为茎用芥菜种质资源的保存和创新提供必要的依据。本研究以茎瘤芥细胞质雄性不育系(陈竹君等，1995)为试验材料，分别建立了通过外植体直接和间接

6、形成不定器官，以及茎顶伸长途径(大泽腾次，1998)，即通常所说的“芽生芽”方式，来获得再生植株的再生体系。同时对外植体脱分化形成的愈伤组织和不同途径获得的再生植株的遗传稳定性进行了分析。其主要结果归纳如下：(1)建立了通过茎瘤芥子叶诱导愈伤组织再分化不定芽的再生体系。茎瘤芥的子叶培养在加有不问浓度NAA、BA和2,4．D的MS培养基上可以诱导出具有不同特性的愈伤组织，而其中又以MS+0．25mg-L—NAA+0．25mg·L～2,4一D+0．5mg·L’1BA的配比获得的愈伤组织性状最佳。愈伤组织在MS含有不同浓度分化培养基

7、上分化频率极低。但当培养基中加入一定量的头孢霉素或羧苄青霉素时却促进了愈伤组织的分化。(2)建立了茎瘤芥予叶直接诱导不定芽的再生体系。茎瘤芥的子叶块培养在Ms+1．0～5．0mg·L-1BA+O．05mg·L1NAA的培养基上可以直接诱导出不定芽，其中在MS+3．0mg·L。1BA+0．05mg—L‘1NAA培养基上的再生频率最高，且每块子叶再生的平均芽数也最多。(3)建立了“芽生芽”再生体系。带芽茎段在MS+O．1～3．0mg．LoBA+o．05mgtL。1NAA上都能长出芽来，而且每个茎段上诱导出的芽数随BA浓度的升高而增

8、加，但再生芽的玻璃化趋势也随之明显。同时，我们还通过该途径建立了以田间植株为材料的再生体系，并将其应用于降低空心率的辅助育种研究，取得了较好的结果。(4)在愈伤组织水平上，对其遗传稳定性进行了鉴定。经流式细胞仪检测，愈伤组织在染色体水平上没有明显的差异。但用RAPD分子标记技