血管紧张素ⅱ受体1和受体2在小鼠肾小管发育中的表达

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1、血管紧张素Ⅱ受体1和受体2在小鼠肾小管发育中的表达【摘要】目的探讨血管紧张素Ⅱ受体1(AngiotensinⅡreceptortype1，AT1R)和受体2（(AngiotensinⅡreceptortype2，AT2R)在小鼠肾小管发育中的表达及其与肾脏发育的关系。方法采用免疫组织化学方法和体视学方法检测胚龄14、15、16、18天胎鼠及生后1、3天仔鼠肾小管AT1R和AT2R的表达。结果AT1R于胚龄15天开始出现在肾小管，胚龄16天达到高峰，随后表达逐渐减弱，生后3天微量表达；AT2R于胚龄16天开始出现在

2、肾小管，胚龄18天达到高峰，以后表达逐渐减弱，至生后3天基本消失。结论小鼠肾脏发育早期AT1R和AT2R与肾小管的增殖和分化密切相关。【关键词】血管紧张素Ⅱ受体1；血管紧张素Ⅱ受体2；小鼠；肾小管；体视学Abstract:ObjectiveToobservetheexpressionofangiotensinⅡAT1receptorandangiotensinⅡAT2receptorintubulesandinvestigatetherelationshipsbetandkidneydevelopmentinmo

3、use.MethodsTheexpressionofAT1receptorandAT2receptorinedandanalyzedinthekidneyofmouseembryosat14d,15d,16d,18d,16dbyimmunohistochemistry.ResultsAtE15,AT1receptoremerged.AtE16,theexpressionofAT1receptorerged.AtE18,theexpressionofAT2receptorostabundantandthendecr

4、easedgradually.ConclusionsItissupposedthattheexpressionofAT1receptorandAT2receptorappearstocorrelateentofmousekidney.Keyouse;tubule;stereology近年来研究证实，血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）是肾素血管紧张素系统中最重要的活性肽，在肾脏的发生发育中起着非常重要的作用［1］。AngⅡ主要通过与它的受体结合发挥生物学功能，现在已经明确的受体主要有血管紧张素Ⅱ受

5、体1(angiotensinⅡreceptortype1，AT1R)和受体2(angiotensinⅡreceptortype2，AT2R)［2］。已有研究证实AngⅡ对肾小管有促增长、调亡的作用。但AngⅡ是与何种受体结合所发挥的这些作用还未明确。本实验应用免疫组织化学技术并结合体视学方法观察AT1R和AT2R在小鼠早期肾小管发育中的表达，探讨AT1R和AT2R在早期肾小管发育中的作用机制。1材料和方法[*2]1.1材料25～30g的成年健康雌、雄性昆明系小白鼠24只，由锦州医学院实验动物中心提供；抗AT1R、

6、AT2R多克隆抗体、SABC试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。1.2标本制备昆明系小白鼠雌、雄（3∶1）同窝饲养。见雌鼠阴道栓出现计为胚龄（embryonicdays，E）0d。选取胚龄14d、15d、16d、18d的胎鼠及生后日龄1d、3d的仔鼠处死后剖腹取出肾脏，10%福尔马林溶液固定，梯度酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡，石蜡包埋，切片5μm。1.3AT1R和AT2R免疫组织化学染色(SABC法)将切片贴附于多聚赖氨酸处理过的载玻片上，进行免疫组织化学染色。染色步骤如下：二甲苯脱蜡，3%过氧化氢封闭内源性过氧

7、化物酶，枸橼酸盐煮沸，正常山羊血清封闭，一抗（工作浓度1∶150）湿盒中4℃过夜，二抗37℃孵育30min，SABC37℃孵育30min，DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。以PBS代替一抗作阴性对照。1.4体视学测量每个动物的肾脏系统随机选取5张切片，每张切片在油镜下按“S”形等间隔选取视野，采用方格测试系统，交点计数法测算AT1R和AT2R在肾小管细胞阳性表达的体积密度（Volumedensity），参照系为肾皮质，计算公式为Vv=Pi/Pc,其中Pi为测试系统落在阳性细胞上的点数，Pc为落在肾皮质上的

8、点数。1.5统计学处理应用SPSS软件进行方差分析，P<0.05认为有显著性差异。2结果[*2]2.1免疫组织化学染色结果AT1R和AT2R在小鼠肾小管中有不同程度的表达。细胞膜和细胞浆呈现不同程度的棕黄色为阳性结果(照片1～2)。3讨论AngⅡ的生物学效应是与其受体结合实现的，AngⅡ的特异受体主要有AT1R和AT2R。AT1R和AT2R均属于G蛋白偶联受体［3］