糖尿病肾病患者晚期氧化蛋白产物与sod、tnf

《糖尿病肾病患者晚期氧化蛋白产物与sod、tnf 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、糖尿病肾病患者晚期氧化蛋白产物与SOD、TNF孙丽娜,吴志贤,张胜利,林忆阳,李春梅,薛耀明【关键词】糖尿病肾病；,晚期氧化蛋白产物；,超氧化物歧化酶；,肿瘤坏死因子　　摘要:目的研究糖尿病肾病患者血清蛋白氧化损伤指标晚期氧化蛋白产物（AOPP）的改变及其与超氧化物歧化酶（SOD）、肿瘤坏死因子α(TNFα)的关系，探讨蛋白氧化损伤与糖尿病肾病氧化应激状态和炎症因子的关系。方法糖尿病患者85例，根据尿微量白蛋白排泄率和肌酐水平分为无肾病(DM)组、早期肾病(DN3)组、临床肾病(DN4)组、终末期肾病(DN5)组

2、。用组(58.2±17.7)μmol/L（P0.01）；DN3组血清AOPP(72.7±17.2)μmol/L与DM组比较无统计学意义。血清AOPP与SOD显著负相关（r=-0.217，P0.05），与TNFα无明显相关性(r=-0.064，P0.01)。结论临床糖尿病肾病患者的血清蛋白氧化较无糖尿病肾病患者增强，并且与糖尿病肾病氧化应激状态有关，但与炎症因子TNFα无明显关系。　　关键词:糖尿病肾病；晚期氧化蛋白产物；超氧化物歧化酶；肿瘤坏死因子α　　研究发现氧化应激与糖尿病肾病的发生发展密切相关[1]。氧化应

3、激所致蛋白氧化损伤可能在糖尿病血管并发症中有重要作用意义。Kalousova等发现，从2型糖尿病的启动到临床发病的多年时间中，当轻度高血糖导致氧化应激后，蛋白氧化损伤就已经发生[2]。在肾脏疾病患者，氧化应激可促进单核吞噬细胞活化，介导炎症因子释放，导致蛋白氧化损伤[3]。因此，可能糖尿病肾病患者的蛋白氧化损伤是逐渐加重的，且与炎症因子有关。笔者检测不同时期糖尿病肾病患者血清蛋白氧化损伤指标晚期氧化蛋白产物（AOPP）水平，并观察其与血清抗氧化系统的指标超氧化物歧化酶（SOD）、炎症因子肿瘤坏死因子α(TNFα)

4、的相关性，探讨蛋白氧化损伤与糖尿病肾病氧化应激状态和炎症因子的关系。　　1对象与方法　　1.1对象按照1999年组），UAER持续30～300mg/24h为早期肾病组（DN3组），UAER＞300mg/24h为临床肾病组（DN4组），血清肌酐（Cr）＞445μmol/L为终末期肾病组（DN5组）。排除急、慢性感染和急性心脏、肝脏、胃肠道及脑血管病变患者；排除原发性慢性肾小球肾炎和其他继发性蛋白尿疾病如高血压肾病、慢性肾盂肾炎、系统性红斑狼疮性肾病等。患者进入研究1月未服用抗氧化剂如维生素E、维生素C。各组年龄、病

5、程、体质量指数（BMI）比较见表1。　　表14组患者的临床资料（略）　　Tab1Clinicalcharacteristicsofthestudypopulation　　除性别为例数外，其余数据为x±s.DM:无肾病；DN3：早期肾病；DN4：临床肾病；DN5：终末期肾病；UAER：尿微量白蛋白排泄率（(正常值：30mg/24h)；Cr：血清肌酐（正常值：66～133μmol/L).　　1.2试剂与设备冰醋酸,碘化钾溶液1.16mmol/L，氯胺T，迭氮钠磷酸盐(NaN3)缓冲液(pH7.0)，三氯醋酸(TCA)

6、溶液0.61mmol/L，试剂均购自原第一军医大学试剂中心。黄嘌呤，黄嘌呤氧化酶0.25mg/mL，[5,5’二硫代双(2硝基苯甲酸)]（DTNB）显色液1.0mmmol/L，GSH溶液1.0，均购自美国Sigma公司。化学发光增强剂lucigenin2mmmol/L购自美国MolecularProbe公司；人血清新喋呤ELISA试剂盒96T购自德国IBL公司。分光光度计(T680,上海分析仪器厂)。化学发光仪(ultiskanMk3,美国Thermo公司）。　　1.3方法受试者清晨空腹采静脉血2mL,室温静置1

7、h内离心10min(2000r/min),取血清避光保存于-70℃冰箱待测,所有标本一次测定。　　1.3.1AOPP测定按文献[3]的分光光度计法加以改进：血清与PBS按1∶5稀释，以氯胺T同法稀释作空白对照，加入1.16mmol/LKI10μL及乙酸20μL后立刻测340nm处的吸收值。AOPP浓度以氯胺T含量表示。　　1.3.2SOD及TNFα测定SOD采用黄嘌呤氧化酶法:用磷酸钾缓冲液配制含0.1mg/mL黄嘌呤和2μmol/Llucigenin化学发光液。将样品10μL加入96孔板内，空白加入PBS10μ

8、L。每孔加入新鲜配制的化学发光液200μL。在化学发光仪上测本底发光值(25℃)。每孔加入黄嘌呤氧化酶10μL启动化学发光，连续测定发光值(6min)。将最高发光值减本底，计算各样品抑制发光的百分率，活性单位定义为：抑制50%发光值为一个活性单位，计算每mL样品活性单位(u)。　　TNFα的测定采用ELISA方法：加生物素标记的抗体50μL于包被抗体的微孔板的微孔内。再加