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1、Survivin和Ki67在弥漫浸润性星形细胞瘤中的表达及意义黄颖1,2陈雪芹2陈铌2周桥2(通讯作者)(1福建省立医院病理科/福建暖科大学省立临床医学院福建福州350001)(2四川大学华丙医院病理科四川成都610041)【摘要】目的探讨凋亡相关分子survivin及增殖指数Ki67在人弥漫浸润性星形细胞瘤中的表达与临床病理指标及预后的关系。方法用RT-PCR方法及免疫印迹法(westernblot)检测73例新鲜弥漫浸润性星形细胞瘤组织和12例正常人脑组织survivin的表达情况，用免疫组织化学法检测对应石蜡组织中survivin和Ki
2、67表达情况。结果73例弥漫浸润性星形细胞瘤中survivinmRNA阳性率为60.3%(44/73)，免疫印迹法survivin蛋白阳性率为56.2%(41/73),免疫组化检测survivin核阳性率(survivin-N)为5.67%,Ki67指数为8.39%,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)osurvivinmRNA、蛋白的表达率、survivin-N及Ki67指数均随弥漫浸润性星形细胞瘤WHO级別的升高而增加，并与患者的预后负相关(P<0.01);survivin-N和Ki67指数正相关，相关系数rs达
3、0.899(P<0.05)o结论survivin和Ki67在弥漫浸润性星形细胞瘤中的表达与WHO级别及预后相关。临床工作中釆用免疫组织化学法检测survivin核标记指数(survivin-N)与Ki67指数，可能有助于判断患者的预后，对指导临床'冶疗有一定的帮助。【关键词】弥漫浸润性星形细胞瘤survivin增殖指数预后【中图分类号】R730【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2012)33-0078-03弥漫浸润性星形细胞瘤是最常见的原发性脑肿瘤，主要包括3个病理学亚型：弥漫型星形细胞痛(diffuseastrocyto
4、ma,DA,WHOII级)、间变型星形细胞瘤(anaplasticastrocytoma,AA,WHOIII级)和多形性胶质母细胞痛(glioblastomamultiforme,GBM,WHOIV级)。弥漫浸润性星形细胞瘤的特点是呈浸润性生长,经手术切除再辅以放化疗，效果仍然不理想，容易复发并常伴奋演进，从低级别发展为高级别［1】。细胞存活、生长和凋亡的调控缺陷与星形细胞瘤的发病机制密切相关。凋亡相关分子survivin是抗凋亡家族的成员，在胚胎及胎儿组织中高表达，但在正常的分化成熟的组织中几乎检测不到Survivin的表达，而在许多肿瘤中
5、则检测到Survivin的过表达。本研究旨在探讨一宗大样本弥漫浸润性星形细胞瘤中survivin和增殖指标Ki67的表达与预后的关系。1材料与方法1.1材料收集2004年3月至2007年4月四川人学华西医院的弥漫浸润性星形细胞瘤新鲜标本73例，同吋收集其对应的石蜡包埋组织。所奋病例均经病理确诊，其中弥漫型星形细胞瘤(DA)25例，间变型星形细胞瘤(AA)17例，多形性胶质母细胞瘤(GBM)31例。平均年龄46岁，男：女=1.4:1。另取同期12例脑外伤患者内减压正常脑组织作为对照组。1.2方法1.2.1逆转录(RT)-PCR特异性的survi
6、vinPCR引物根据GenBank的序列设计，由Invitrogen公司合成。survivin引物序列FP:5’-CAGATGACGACCCCATAGAGGA-3’;RP:5’-ATGGCACGGCGCACTTTCTCC-3’。β-Actin作为内控，引物序列FP:5’-CTGGCACCACACCTTCTACAATG-3’;RP:5’-CCTCGTAGATGGGCACAGTGTG-3’。PCR采用TaqDNA聚合酶(Takara,Japa
7、n)扩增：95°C3分钟，95°C30秒，60°C30秒,72°C30秒，30循环，72°C5分钟。1.2.2蛋白印迹分析(Westernblot)Survivin的第一抗体(兔多抗,1:1000,R&D,USA)以GAPDH的第一抗体(鼠单抗,1:10,000;上海康成，中国)作为内对照。辣根过氧化物酶二抗购自Zymed.1.2.3免疫组化抗体为兔抗人survivin多克隆抗体(R&D,USA)及鼠抗人Ki67单克隆抗体(DakoCytomation，Denmark)。免疫组化采用标记链衆和素-生物素（LsAB）法，SP、D
8、AB试剂盒购自Zymed（CA.USA）。高压抗原修复3分钟。抗体工作浓度分别为survivin,1:600;Ki67,1:100。DAB显色。PBS缓冲液代替一抗
