胃癌微淋巴管的增殖状态及分布特点

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1、胃癌微淋巴管的增殖状态及分布特点【摘要】目的探讨胃癌微淋巴管的分布特点以及增殖状态。方法应用双重免疫组织化学染色的方法，采用Podoplanin及Ki67标记56例胃癌及12例相应正常胃组织，并检测微淋巴管及微淋巴管内皮细胞的增殖活性。结果正常胃组织微淋巴管在黏膜固有层、黏膜下层、肌层及浆膜层均可见到，且在黏膜下层数目最多，多呈扩张状，壁薄，形态大小不一，其微淋巴管密度（LMVD）为6.93±1.32。胃癌微淋巴管在癌周及癌内数目及形态均不同，癌内微淋巴管数目少，其LMVD为5.83±3.26，并且多闭锁呈条索状；癌周微淋巴管数目多，其LMVD为11.89±3.95，且扩张呈管

2、腔样，有时可在其中发现癌栓。癌周LMVD与癌内比较，差别有高度统计学意义(t=10.1，P<0.01)；与相应正常胃组织比较,差别亦有统计学意义(t′=7.52，P<0.05)。胃癌癌周微淋巴管内皮细胞Ki67指数与癌内微淋巴管及相应正常胃组织微淋巴管相比较，差别均有统计学意义(t=6.38、6.88，P<0.05)。结论胃癌组织中存在新生微淋巴管，癌周数目较多，且具有较高增殖活性，提示癌周微淋巴管可能是发生淋巴结转移的主要功能性淋巴管。【关键词】胃肿瘤微淋巴管密度淋巴管生成［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatethedistribu

3、tionpatternandproliferationoflymphaticvesselsingastriccancer.MethodsUsingmonoclonalantibodyagainstpodoplanin,lymphaticvesseldensity(LMVD)intissuesof56casesofgastriccancerandof12casesofnormalstomachphaticendotheliummunohistochemicallabelingusingKi67.ResultsLymphaticvesselsalstomachphaticvess

4、elsincanceroustissuesens,lymphaticvesselsinpericanceroustissuesmorethanthoseofnormaltissues(LMVD11.89±3.95)ens.ThedifferencesinLMVDsamongdifferenttissuesamplesphaticendotheliumalgastricsubmucosaandincanceroustissues(t=6.38,6.88;P<0.05).ConclusionInpericanceroustissues,needlymphaticvesselsm

5、ayplayanimportantroleinlymphaticmetastasis.［KEY分期标准,其中Ⅰ期＋Ⅱ期35例,Ⅲ期＋Ⅳ期21例。根据肿瘤浸润深度，侵犯至黏膜及黏膜下层者6例，侵犯至肌层者18例，侵犯至浆膜及浆膜外者32例。根据病情进展情况，早期胃癌6例，中晚期胃癌50例。伴有淋巴结转移者27例，无淋巴结转移者29例。所有蜡块均行连续石蜡切片，厚度为5μm，行免疫组织化学双重染色。1.2免疫组织化学双重染色一抗分别为淋巴管内皮细胞特异性标记物Podoplanin和检测细胞增殖状态的抗体ki67，分别购自Angiobio公司和北京中杉试剂公司。HistastainT

6、MDS双染试剂盒购自Zymed公司。染色步骤如下：切片脱蜡，梯度乙醇水化，使用过氧化氢灭活内源性过氧化物酶,微波修复抗原，血清封闭，加一抗（Podoplanin，工作浓度为1∶200），加生物素化二抗，加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，用DAB显色，显微镜下监控，蒸馏水终止反应。加双染增强剂，再次微波修复抗原，血清封闭，加第二种一抗（Ki67，工作浓度为1∶100），加生物素化二抗，加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，用AEC显色，显微镜下监控，自来水终止反应，苏木精复染，使用水溶性封片剂封片。以结肠癌切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。1.3观察指标分别测定相应正常胃

7、组织、胃癌癌内、癌周组织微淋巴管密度（LMVD）及微淋巴管内皮细胞Ki67指数。1.4结果判定以Podoplanin染色阳性的单个内皮细胞或内皮细胞簇计为一个阳性微淋巴管。参照VD计数。在低倍镜下先选取胃癌癌周、癌内，以及相应正常胃组织阳性染色微淋巴管最密集区即“热点”，然后在200倍视野下计数LMVD，每例计数3个视野，取均值。微淋巴管被染为棕黄色，而具有增殖活性的微淋巴管内皮细胞核及胃癌细胞核呈鲜红色。参考VD为6.93±1.32。胃癌组织中也可见到明确的Podoplani