重楼皂苷Ⅶ抑制白色念珠菌生物被膜形成的作用机制

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1、分类号：学校代码：10165密级：学号：201511000894硕士学位论文重楼皂苷VII抑制白色念珠菌生物被膜形成的作用机制作者姓名：姜路路学科、专业：微生物学研究方向：微生物生化导师姓名：谢明杰教授2018年3月摘要白色念珠菌（Candidaalbicans）是引起院内严重感染的条件致病真菌之一。而C.albicans所形成的生物被膜，由于可增强其耐药性和免受宿主免疫系统的攻击，致使免疫缺陷人群由于C.albicans感染而带来的危害大大增加。目前两性霉素B等抗生素是临床治疗C.albicans感染的主要药物，但这些药物具有一定的毒副

2、作用，长期使用能增加对肾脏的损伤，因此获得高效、低毒的用于治疗C.albicans感染的临床药物是目前研究的热点。重楼（ParisL）是我国的传统中药，已有的研究结果表明，重楼皂苷有多种药理作用，如抗肿瘤作用和抗真菌作用等。但目前关于重楼皂苷对C.albicans形成的生物被膜的抑制作用研究较少，对其作用机制的研究尚未见相关报道。鉴于重楼皂苷VII（PolyphyllinVII）是重楼皂苷的主要有效成分之一，因此本文以PolyphyllinVII为实验材料，系统地研究了其抑制C.albicans生物被膜形成的作用机制，研究结果如下：(1)

3、通过微量稀释法测定了PolyphyllinVII对C.albicans的抑制作用。实验结果显示，PolyphyllinVII对游离态的C.albicans有显著的抑制作用，其对C.albicans的最低抑菌浓度（MIC80）和最低杀菌浓度（MFC）均为8µg/mL。(2)通过激光共聚焦显微镜检测了PolyphyllinVII对C.albicans生物被膜的厚度及细胞活性的影响。实验结果显示，PolyphyllinVII能降低C.albicans生物被膜的厚度及细胞活性，且呈浓度剂量依赖，即随着药物浓度的增加，C.albicans所形成的生

4、物被膜的厚度越薄，细胞活性越低。其中16µg/mL的PolyphyllinVII，与对照组相比，能使C.albicans生物被膜的厚度由对照组的53µm减少到18µm，细胞活性降低80%。(3)通过微量稀释法测定了PolyphyllinVII对C.albicans成熟生物被膜的抑制作用。实验结果显示，PolyphyllinVII对C.albicans成熟生物被膜也有显著的抑制作用，其抑制C.albicans成熟生物被膜的MIC80和MFC均为16µg/mL。(4)通过MTT法测定了PolyphyllinVII对C.albicans黏附作用

5、的影响。实验结果显示，PolyphyllinVII能抑制C.albicans的黏附，且呈浓度剂量依赖。其中64µg/mL的PolyphyllinVII，与对照组相比，可使C.albicans细胞的黏附率降低了65%（P<0.01）。表明PolyphyllinVII可通过抑制C.albicans的黏附来抑制其生物被膜的形成。(5)通过MTT法及倒置显微镜观察了PolyphyllinVII对C.albicans黏附不同时间后的抑制作用。实验结果显示，C.albicans的黏附时间越短，PolyphyllinVII对其抑制作用的效果越好。其中8

6、µg/mL的PolyphyllinVII，与对照组相比，对黏附2h和4h后的IC.albicans的抑制率分别为82%和77%（P<0.01）。表明PolyphyllinVII对C.albicans生物被膜的抑制作用效果与其黏附的时间长短有关。(6)通过碳氢检验法测定了PolyphyllinVII对C.albicans细胞表面相对疏水性（CSH）的影响。实验结果显示，亚抑菌浓度的PolyphyllinVII可显著降低C.albicans的CSH。其中6µg/mL的PolyphyllinVII作用菌体48h后，可使C.albicans细胞表

7、面的相对疏水性，由对照组的0.7降至0.2（P<0.05）。表明PolyphyllinVII能通过降低C.albicans的CSH来抑制C.albicans的黏附。(7)通过倒置显微镜观察了PolyphyllinVII对C.albicans由酵母相向菌丝相转化的影响。实验结果显示，不同浓度PolyphyllinVII均能抑制C.albicans由酵母相向菌丝相的转化，其中8µg/mL的PolyphyllinVII能完全抑制C.albicans菌丝的形成。(8)通过RT-PCR法检测了PolyphyllinVII对C.albicans的黏附

8、基因和菌丝形成基因的影响。实验结果显示，PolyphyllinVII能显著降低C.albicans生物被膜形成的相关基因的表达水平，且呈浓度剂量依赖。其中8µg/mL的PolyphyllinV