重楼皂苷单体抗转移作用研究-硕士论文

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1、重楼皂苷抗肿瘤肺转移作用研究Anti-tumorPulmonarymetastaticActivityofRhizomaParidisSaponins一级学科：化学工程与技术学科专业：应用化学研究生：满淑丽指导教师：高文远教授天津大学药物科学与技术学院二零一一年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明

2、确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权天津大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要现代药理研究证明重楼皂苷RPS具有良好的抗肿瘤及肺转移活性。本文通过药学研究确定重楼皂苷化学组成，通过灌胃给药入血成分分析确定其抗肿

3、瘤作用物质基础，通过小鼠急性毒性试验确定其毒性剂量，并利用三种肿瘤动物模型确定其抗肿瘤疗效，最后通过体内、体外药理试验探讨了其抗肿瘤作用机制，为创新中药的研制开发奠定基础。n首先通过HPLC-ELSD、HPLC-MS等色谱分析技术定量分析了重楼皂苷中8种皂苷单体的含量为33.8%，并定性分析其主要成分。通过液质分析共鉴定23个甾体皂苷，同时推导了四种皂苷类型的质谱裂解规律。n依照以上规律，采用HPLC-MS、UPLC-Q/TOF-MS等色谱分析技术，对重楼皂苷大鼠灌胃给药入血成分进行了定性分析。通过对RPS及其纯化物PM灌胃给药前及入血后成分比较

4、，发现RPS给药后，各类型皂苷均可在血清中出现；薯蓣与偏诺皂苷同时服用会促进这两类型向原型皂苷转化，推测PM灌胃后在体内发生了F环开环、脱糖基化、糖基化、羟基化、甲基化等反应。为明确RPS安全性，通过急性毒性实验确定其LD50为1910mg/kg。采用低于LD50/15剂量，利用三种肿瘤动物模型验证了RPS的抗肿瘤活性。结果表明，RPS疗效与顺铂相当，但脾毒性较低；其中RPS高剂量组对Lewis肺腺癌相对抑瘤率为40.9%，对H22小鼠肝癌抑瘤率为40.2%。对Lewis肺腺癌肺组织病理切片分析发现，RPS不仅可以降低肺部转移灶及瘤栓的数量，而且

5、可以保护肺泡的完整结构，具有良好的抗肿瘤活性。在明确RPS抗肿瘤作用物质基础上，采用细胞划痕、Transwell小室等体外试验，证明PM、重楼皂苷II（FC）可抑制癌细胞迁移；利用明胶酶谱法、荧光免疫组化、蛋白印迹等方法明确RPS抗肿瘤作用机制主要是通过不同类型皂苷选择性作用于不同类型MMPs，协同发挥抑转移作用；研究其构效关系发现，17位羟基可增加偏诺皂苷对膜型金属蛋白酶的敏感性，但其同时降低了皂苷的抗转移能力。最后通过动物模型也证明PM、FC具有一定的抗肿瘤活性。综上所述，本研究证明重楼皂苷具有良好的成药性，即质量可控、安全有效。以上研究为开

6、发具有自主知识产权的抗肿瘤新药的临床前研究奠定基础，同时也为后期重楼皂苷增效减毒合理应用提供了理论依据。关键词：重楼皂苷，薯蓣皂苷，偏诺皂苷，肺转移，抗肿瘤作用，基质金属蛋白酶ABSTRACTParispolyphyllavar.yunnanensis(Fr.)Hand.-Mazz.(PPY)extracts,RhizomaParidissaponins(RPS)asbioactivesteroidalsaponins,havebeenfoundtoshowstronganti-tumoractivity.Inthisthesis,thechem

7、icalcompositionofRPSwasdeterminedbypharmaceuticalresearch;thematerialbasisofitsanti-tumoreffectwasdetailedbytheinvestigationoftheserumpharmacochemistry.Accordingtothetoxicitystudies,wedesignedappropriatedosesandusedthreetumoranimalmodelstodetermineRPS’santi-tumorefficacy.Fina

8、lly,wediscussedtheantitumormechanismofRPSinvivoandinvitro.Allthesere