znf451和tgf―β在胃癌中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性研究3

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1、ZNF451和TGF-3在胃癌中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性研宄3【摘要】目的:探讨锌指转录因子451(ZNF451)在胃癌发生、发展过程中的作用及其与血管内皮生长因子(TGF-3)的相关性。方法：用组织芯片和免疫组织化学法检测144例胃癌组织及对应癌旁组织中ZNF451、TGF-自的表达。结果：ZNF451在胃癌中阳性表达率为71.5%，高于癌旁组织的18.8%(P【关键词】胃癌；免疫组织化学；ZNF451；TGF-；预后TheExpressionofZNF451andTGF-3inGastricCan

2、cerandTheirAssociationwithClinicopathologicalandPrognosticSignificance/RONGRui-zhou，HANZhi-wei，LIShu-jing，etal.//MedicalInnovationofChina,2016,13(23)：001-005【Abstract】Objective:Toinvestigatethecorrelationoftheexpressionofzincfingertranscriptionfactor451(ZNF451

3、)andtransforminggrowthfactorbeta(TGF-13)withthecarcinogenesisandtumorprogressioninhumangastriccancer.Method：Immunohistochemicalmethod(SP)wasusedtodetecttheexpressionofZNF451andTGF-proteinin144caseshumangastriccancertissuesandpara-carcinomatissues.Result：Thepos

4、itiverateofZNF451andTGF-旦ingastriccancertissueswere71.5%，79.9%，higherthanthatpara-carcinomatissuesof18.8%,9.1%（P1材料与方法1.1材料选取2010年1月-2013年12月本院行胃癌根治术、术后病理诊断明确、临床资料完整的、术前未行放化疗的术后石蜡标本作为研宄对象，通过对HE切片的复阅，选取癌组织及对应的癌旁组织144例，所有病例病理报告均为腺癌。其中，男111例，女33例；年龄〉60岁组67例，彡60岁组

5、77例;TNM分期I〜II期50例，III〜IV期94例；有淋巴结转移者107例，无淋巴结转移者37例。1.2主要试剂ZNF451antibody（Sigma），兔抗人TGF-3抗体（武汉博士德生物工程有限公司），羊抗鼠/兔二抗（福州迈新生物技术开发有限公司），DAB显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）。1.3免疫组织化学1.3.1组织芯片制备使用组织芯片蜡块制备仪（CHLOE,北京）制备受体蜡块，按照实验设计采用10X6阵列（间距1mm、内径2.2mm）。按病理号调取所有HE染色玻片，镜下复读并于病变典型部

6、位做一记号标记，然后在供体蜡块上相应位置做标记，使用配套的取样套针穿刺取材，并将获得的组织芯小心地注入受体蜡块孔内，于受体蜡块的右下角两个孔留空白以供定位之用。制备好的组织芯片常规4um厚连续切片，将其敷贴于免疫组化专用载玻片上，恒温箱烤片，70°C过夜。1.3.2免疫组织化学染色将过夜烤片的切片按实验步骤过缸，分别进行脱蜡，水化，消除内源性过氧化物酶，使用PBST漂洗后进行高温高压热修复，冷却至室温，滴加一抗（ZNF451抗体浓度1:200,TGF-M亢体浓度1:200）4°C过夜，PBST漂洗，加入羊抗鼠/兔二

7、抗，37°C孵育20min，PBST漂洗行DAB显色，镜下观察显色程度，及时以自来水中止显色反应，苏木素复染3min，盐酸乙醇分化，脱水后中性树胶封片保存。以PBS作阴性对照。1.3.3结果判断标准每张切片高倍镜下随机选取5个视野，观察并记录细胞染色强度：细胞无显色0分；细胞浅黄色，1分；细胞棕黄色，2分；细胞黄褐色，3分。记录阳性细胞占肿瘤实质细胞的百分比：阳性细胞数占肿瘤实质细胞＜25%,1分；25%75%为4分。阳性细胞比例与细胞染色强度计分的乘积为每例标本的最终积分。0.05）。TGF-3表达在肿瘤TNM分

8、期、淋巴结转移、浸润深度、肿瘤大小中的差异有统计学意义（P0.05），见表1。2.3胃癌组织中ZNF451和TGF-P的表达的相关性103例ZNF451阳性的胃癌组织中有89例TGF-表达阳性，14例TGF-3表达阴性；115例TGF-3阳性的胃癌组织中有89例ZNF451表达阳性，26例ZNF451表达阴性。Spearman相关分析显示，ZNF451和TG