兰花之组织培养技术

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1、蘭花組織培養的進展陳福旗國立屏東科技大學農園系、熱帶農業暨國際合作研究所摘要蘭花為台灣重要切花與盆花，尤其以蝴蝶蘭、文心蘭、及拖鞋蘭為最具潛力之種類。目前產業界已經能自行利用無菌播種生產實生苗，及利用生長點或花梗節腋芽培養來大量生產組織培養苗，甚至亦有利用生長點或試管苗葉片誘導擬原球體(PLBs)而增殖的例子。由文獻探討組織培養所使用培養基配方，主要係使用改良MS或花寶為基本鹽類，並添加不同量的BA及NAA；近年亦有使用棉花落葉劑thidiazuron進行增殖的報告，其具有極強的細胞分裂素活性，然而是否會引起組培苗變異仍有待探討。由

2、於品種間的差異相當大，組織培養量產效率就不同，因此產業界均自行研發認為具有實用性的配方。本文概括性地探討培養基、生長調節劑、糖類、及其他因子對蝴蝶蘭及文心蘭再生之影響。一、前言臺灣南部為蝴蝶蘭的原生地之一，其他原生地分佈於菲律賓群島、澳洲、新幾內亞、印尼、馬來西亞、泰國、越南、中國雲南、四川、海南島等區域，全球約有50個原生種。過去二十多年以來，由於民間趣味者的栽培及育種，加上水牆溫室及新栽培技術的引進，使臺灣地區的蝴蝶蘭生產形成一個產業，其產值約為每年30-40億元(李、2002)。主要市場在日本、美國、中國大陸、歐洲等國家。蝴蝶

3、蘭之品種種類相當多，主要由蝴蝶蘭屬(Phalaenopsis)、及該屬與朵麗蘭屬(Doritis)雜交之屬間雜種(Doritaenopsis)。目前蝴蝶蘭盆花在荷蘭及美國盆花市場均已躍居領先地位，荷蘭之蝴蝶蘭公司更積極投入組織培養量產及品種選育；而我國在過去由公家機構或大學進行之蝴蝶蘭相關研究，著重於開花調節(李哖、1986)及栽培管理技術，組織培養或無菌播種及幼苗生長雖已有研究報告發表(涂、李，1987；王、李，1991；Hinnenetal.,1989；Ichihashi,1997；Tanaka,1992；Tsaietal.,1

4、992)，對於擬新投入蝴蝶蘭之業者，仍需重新摸索技術，且即使產業界早已經能夠進行量產瓶苗，其組培關鍵技術均被視為產業機密，且組織培養過程待解決的問題仍然不少，例如如何降低組織培養變異、提高增殖倍率、提高產品品質及生產效率等，均有待進一步建立作業程序開發相關技術，以便產業界能參考使用。文心蘭雜交種係由文心蘭屬(Oncidium)、齒舌蘭屬(Odontoglossum)、堇花蘭屬(Miltonia)及其他可相互人為雜交的屬間雜交種所組成。商業用途為供切花及盆花生產。在花卉市場中販售的蘭科植物中，係一種重要的盆花，尤其是歐美市場消費盆花中

5、價格不錯且銷量不少的種類。10由於蘭花的種類極多，其組織培養技術及各種配方差異極大，本文僅就蝴蝶蘭及文心蘭進行討論。其他蘭屬的組織培養，可參考Arditti&Ernest(1993)、富山昌克(2000)等之著作。二、蝴蝶蘭組織培養蝴蝶蘭種苗生產主要使用兩種途徑，其一為經雜交授粉果莢成熟時，利用無菌播種，生產實生苗(李，1990)；另一途徑為利用花梗上未著生花苞的節位，或頂端分生組織，或利用幼嫩花梗節間，進行培養及增殖(朱、1988；Tanaka,1992)，增殖方式包括誘導擬原球體(protocorm-likebodies,PLB

6、s)(Ishiietal.,1998;Lin,1986)、以及以芽體增殖方式進行繁殖。以硝酸銀浸漬花梗節或添加於培養基中，可降低蝴蝶蘭花梗培養時的褐化，並可提高組織培養效率(王、李，1991)。Young等人(2000)利用生物反應器來增殖PLBs，其增殖倍率雖高，並未提到其穩定性。Yamazaki等人(1997)研究11個蝴蝶蘭及朵麗蝶蘭品種之花梗及其莖頂培養，在NewDogashima培養基中產生芽體或PLBs的能力因品種而異。由以往組織培養報告中可以看出，大多數的文獻均使用細胞分裂素BA及生長素NAA，所培養出的植株，有的報告

7、說沒有觀察到變異(Tokuhara.&Mii,1993)，有的則會產生變異(Chenetal.,1998；Tokuhara&Mii,1998)，且變異率介於0%到100%(Tokuhara&Mii,1998)。此外若於培養基中添加2,4-D，可能會造成組織培養苗倍數體的變異(Mishibaetal.,2001)；因此有必要重新檢討評估蝴蝶蘭組織培養增殖體系、培養基類型及生長調節劑種類對於芽體增殖之效果，及其潛在之變異性，以便產業界可以在進行組織培養時，做為選擇培養基之參考。1、基本培養基Murashige&Skoog(1962)為最

8、常被使用的基本培養基，然而在蝴蝶蘭組織培養上，若使用全量，生長之芽體或葉片或PLBs似乎較易褐化死亡(謝等，1993；Parketal.,1996)。降低大量元素至半量或1/4量對於芽體增殖或PLBs增殖比用全量有效(王、李，1991