文心兰组织培养.ppt

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1、文心兰组织培养及苗期调控技术的应用研究StudiesonTechnologiesoftheOncidiumTissueCultureandtheSeedingsStageControlling兰花是我国的十大传统名花之一，栽培历史悠久。2000多年前就被用来沐浴或随身佩带，被孔子尊之为“王者香草”。唐宋时，春兰﹑建兰等得到了广泛栽培。这一类兰花称为国兰，多为地生兰。相对于国兰而言气生兰称为洋兰。它兴起于西方，种类很多，有蝴蝶兰﹑大花惠兰﹑等。文心兰属Oncidium是兰花中的大属之一，原种约有750多种，大多数为气生种，有部分为半气生种或地生种。文心兰的分布地

2、域广阔，原产于墨西哥，西印度群岛，巴西等地。文心兰的花小而繁多，颜色鲜艳多彩，形态变化多样，因其形似舞女，故有称舞女兰。文心兰的花期因品种而异，花朵连续不断的开放，可持续1-3个月，是上等的切花材料也可盆栽观赏。分株繁殖，一株文心兰一年仅繁殖2-3个芽，繁殖系数低。组织培养繁殖，可以加快繁殖速度，进行工业化生产。早在1967年，Bertch对文心兰茎尖进行了培养，Fast(1973)用具有休眠芽的花梗节段作为外植体，成功诱导形成了再生植株。目前的文心兰组培研究仍存在一些问题。引言文心兰试管苗生产中亟待的问题目前文心兰的组织培养研究仍停留在研究培养基的生化组成成

3、分的阶段，培养的试管苗质量较差，生产成本较高，而且试管苗的销售时间较短，不利于集中生产。满足不了市场要求在限定的期间内（栽培的季节性）大量生产出规格一致的试管苗。因此培养低成本、高质量试管苗，并能短期保存，计划性生产是当前文心兰种苗产业化过程中亟待的问题。原球茎的诱导技术的应用试管苗培养新技术的研究文心兰试管苗苗期调控新技术的应用研究原球茎的高效增殖的研究1.　材料实验用文心兰品种为薄叶系文心兰Aloha‘Iwanaga’。茎尖：从母株上切取叶片尚未展开的幼苗，剥去叶片，露出侧芽，流水冲洗；消毒用70%的酒精浸10秒钟，再用8%的次氯酸钠溶液中浸10分钟，用无

4、菌水冲3次备用。花梗：取具有休眠顶芽的文心兰花梗，切取2cm长的顶端部分，去掉叶鞘，进行消毒。用手术刀除去顶芽最尖端部分，切取尖部下面2-3mm的部分进行培养。原球茎的诱导技术的应用2　方法培养方式以500ml三角瓶为培养容器，在三角瓶中注入以Gellangum为凝固剂的固体培养基。三角瓶以橡皮塞封口。为增加透气性，橡皮塞在使用前用打孔器钻孔（ф3mm），并贴上直径为5mm的无菌透气膜。进行静止培养。培养基用MS为基本培养基，附加BA(0.5mg/l)及NAA（1mg/l），培养基中添加Gellangum(2g/l),PH均调整至5.3。培养方式置于全自动培养

5、室培养。培养条件中温度：25℃，光强：1700Lx光照时间：每日16小时（16h/d）。原球茎的诱导技术的应用原球茎的诱导技术的应用实验调查项目①灭菌方式实验：去掉叶鞘的花梗用流水冲洗；消毒分别用100%的酒精浸3秒钟；70%的酒精浸3秒钟；70%的酒精浸10秒钟。用无菌水冲洗3次,再用4%的次氯酸钠溶液浸泡10分钟。然后接种到备好的培养基上,每处理接种15个，在设计好的培养条件下培养40天，统计其污染率、枯死率及生存率。②外殖体大小实验：消毒好的茎尖在体视显微镜分别切成0.3mm、0.5mm、1.0mm、1.5mm大小。接种到备好的培养基上,在设计好的培养条

6、件下培养40天，统计其污染率、枯死率及PLB个数。③激素组成实验：消毒好的茎尖接种到备好的培养基上，培养基的激素以BA及NAA各5个组合即0mg/l、0.1mg/l、0.5mg/l、1.0mg/l及2.0mg/l，交差组成25个组合，每组合接种3瓶，在设计好的培养条件下培养40天，观察分化情况。花梗培养的激素浓度为BA0.045mg/l、0.11mg/l、0.23mg/l，NAA0.093mg/l、0.19mg/l、0.37mg/l，分别组成9个组合，每组合接种3瓶，设计好的培养条件下培养40天，统计其污染率、枯死率及生存率。④接种时间实验：从2002年2月至

7、2002年12月，每月1号接种部分茎尖，在设计好的培养条件下培养40天，统计其污染率及PLB个数。原球茎的诱导技术的应用不同的前灭菌处理对文心兰花梗培养的影响不同的处理后，通过40天的培养观察结果如表3-1所示：表3-1文心兰花梗培养的前灭菌处理注1：A为100%的乙醇、浸渍3秒；注2：B为70%的乙醇、浸渍3秒；注3：C为70%的乙醇、浸渍10秒。用三种不同浓度的乙醇浸渍其生存率均在40%以下，差别不大，生存率过低，污染率过高，最大达53%，因此可与后灭菌处理结合使用。用A处理100%乙醇消毒时，其污染率为20%，是3个处理中最低的，但枯死率最高达40%，说

8、明已对外殖体有一定的伤害，应慎用，尤其