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1、...大花惠兰、石斛兰的组织培养（1）材料与方法材料：大花蕙兰大花品种嫩芽。将母株放在温室内盆栽培养,于2～5月陆续从母株上取8cm左右的新芽,剥去最外几层叶片,去芽的上半段，然后在超净工作台上采用三步灭菌处理法处理:先在70%的酒精中处理6s,立即投入10%的次氯酸钠溶液中10min,稍加摇动,取出后用无菌水冲洗,剥去外层2～3枚叶片;再放入5%的次氯酸钠溶液中5min,取出后无菌水冲洗,剥至最后1枚叶片;再放入1%的次氯酸钠溶液中1min,取出后无菌水冲洗数次。以上次氯酸钠溶液中均加入Tween20以利杀菌剂更有效地发挥作用,在无菌条件下剥出约5mm长地茎尖,以生长
2、点为中心,用解剖刀把茎尖切成4个小方块,分别接入已经准备好的培养基上。培养基：原球茎诱导培养基配方:MS+0.5mg/LBA+1.0mg/LKT+2g/L活性炭（activecarbon，AC）。原球茎增殖培养基配方为:MS+0.5mg/LBA+0.8mg/L2,42D+2g/LAC,。幼苗分化及生根养基配方为:MS+KT1mg/L+NAA0.5mg/L+2g/LAC。培养条件培养基pH5.4～5.8,琼脂粉0.6%～0.8%,活性炭0.2%的,防止褐变,培养室温度22～25℃,相对湿度40%,光照12h/d,光照强度为2000lx。（2）结果观察原球茎诱导：把茎尖切成
3、的小块,接入圆球茎诱导培养基上，20天后（或更长时间）观察有无圆球茎出现。结果调查:圆球茎的诱导率=产生圆球茎的茎尖数/接种茎尖数×100%。原球茎增殖：将诱导形成的较大原球茎块切割成直径3～8mm左右的小块,接种在圆球茎增殖培养基上。1个月后统计增殖量，结果调查:原球茎增殖率=有新原球茎的块数/接种块数×100%。幼苗分化及生根：将增殖的充分成熟的较大原球茎块切割成直径3～8mm的小块,接种在原球茎分化及生根培养基上。45d后统计分化率、生根率及根系生长状态。结果调查:幼苗分化率=出芽数/圆球茎个数×100%。幼苗生根率=生根幼苗数/幼苗数×100%。壮苗、驯化与移栽
4、：壮苗。1/2MS，7%琼脂,pH5.4～5.6，5～6周后植株长出粗壮的根系。光照2000lx；容器：23cm×30cm×8cm四周镂空的塑料框；将瓶苗从培养室(恒温室)移至与外界相通的室内放置2d后,去瓶盖炼苗3-7d,洗净瓶苗根部的培养基,用1000倍甲基托布津或多菌灵浸泡组培苗根部,放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软,即可用于移栽；基质。水苔和谷(麦)壳2：河沙1：珍珠岩1（体积,是大花蕙兰组培苗假植的理想基质；白天平均温度在20℃以上,夜间温度在15℃左右。假植相对......湿度控制在80%以上。晴天上午10:00至下午5:00,作70%的遮荫处理，大花
5、蕙兰刚出瓶的植株很小、十分脆弱,放置处要求光照弱，种后用喷雾器将苗株与植材喷洒到湿润为止。每天向叶片喷水数次,保持湿润,切忌过干或过湿。10天后才逐渐增加给水量。良好的浇水管理措施、可大大提高瓶苗移栽成活率。瓶苗移栽20天以后新根长出,可逐渐增加光照强度。每周进行1次根外追肥，可用“花宝1号”或“通用肥”2000倍液喷洒。（3）讨论在原球茎增殖的继代培养中,20～25d继代1次较为合适,此时产生的原球茎未充分成熟,增殖率较高,且颜色为鲜绿色;30d以后新生的原球茎充分成熟,增殖率会有所降低,颜色转为深绿色;原球茎切割块的大小以直径0.5cm为适宜,过小易死亡降低增殖率,
6、过大增殖率也有所降低；在培养基中加入2g/LAC活性碳可以有效的降低褐变率；分化及生根培养时原球茎切割的块越大分化的越早,幼苗长得越壮;同一培养基中培养的时间越长分化率越高;分化和生根可以同步进行。（4）实例大花蕙兰杂交新品种‘西维亚’、‘玛利莲梦露’、‘蒙米拉丝’、‘女皇’为材料，把母株放在温室内盆栽培养,于2月底～4月初陆续从母株上取8cm左右的新芽,从基部切离,用自来水冲洗,再用洗洁净溶液浸泡5min,自来水冲洗10min,剥去最外几层叶片,并剪去芽的上半段.然后在超净工作台上采用3步灭菌处理法处理:先在70%的酒精中处理6s,立即投入10%次氯酸钠溶液中10mi
7、n,稍加摇动,取出后用无菌水冲洗,剥去外层2～3片叶;再放入5%的次氯酸钠溶液5min,取出后无菌水冲洗,剥至最后一枚叶片;再放入1%的次氯酸钠溶液1min,取出后无菌水冲洗数次.以上次氯酸钠溶液中均加入Tween-60以利杀菌剂更有效地发挥作用.在无菌条件下剥出约5mm长的茎尖,以生长点为中心,用解剖刀把茎尖切成4个小方块,分别接入已准备好的培养基上.培养条件：pH5.2～5.6,蔗糖2%,琼脂条0.6%～0.85%,温度22～25℃,光照强度2000lx,每日光照12h。培养基配方：诱导原球茎最佳激素配比为KT0.05mg/L,NAA
