液相色谱基础--1

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1、岛津液相色谱维护保养液相色谱基础知识SHIMADZU液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析流动相只起运载样品分子的能力液相色谱基础知识一、定义色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术移动相：携带样品流过整个系统的流体固定相：静止不动的一相，色谱柱固定液液相色谱基础知识液相色谱基础知识液相色谱流程图溶剂输液泵进样器柱温箱检测器数据处理液相色谱

2、基础知识采用“HPLC”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配流动相的选择溶剂等级水的等级纯化水蒸馏水去离子水波长(nm)纯化水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物吸光率水/MeOH梯度ODS柱鬼峰GradientCurve1ml/min,0-100%MeOHover10minsandholdfor15mins.溶剂等级鬼峰的出现溶剂等级溶剂的等级HPLC级优级纯分析纯都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析

3、纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱甲醇乙睛正己烷分析纯级和HPLC级溶剂的吸光度比较图溶剂等级GeneralMaintenanceandTroubleshooting缓冲液的使用使用前必须过滤使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:用纯水冲洗30-60min（1ml/min），再用甲醇冲洗30min易受到细菌和霉菌的影响溶剂等级不能直接用有机溶剂冲洗过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。脱气：除

4、去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形3）检测器中的气泡产生基线波动无在线脱气应注意：1）每天脱气2）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长溶剂前处理岛津VP系列输液泵目的单元流速范围特性和应用分析LC-10ADVP0.001-9.999无脉动，适于半微量LC和LC-MSLC-10ATVP0.001-9.999非凡的耐用性，适于常量分析*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度液相色谱基础知识LC-10ATvp泵：串联式往复泵LC-10ADvp泵：

5、并联式微体积往复泵LC-10ADVP/LC-10ATVP工作原理单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头LC-10ADVP/LC-10ATVP工作原理液相色谱基础知识梯度洗脱形式：线性梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化和时间成线性比例指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度随时间的变化呈指数关系折线梯度：梯度洗脱装置：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。梯度洗脱形式的选择液相色谱基础知识梯度洗脱：优点：可提

6、高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度注意事项：溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差梯度混合的溶剂互溶性要好梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）1.使用流动相溶解样品--减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要--保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀2.进样前最好使用0.45um的膜进行过滤如果样品很脏，要使用0.2um的膜进行过滤样品处理进样器自动进样器手动进样器原理：（六通阀）

7、注入方式：1）全量注入2）部分注入液相色谱基础知识进样量和检测器响应的关系示意图液相色谱基础知识进样体积检测器响应值定量环体积的一半3倍定量环体积全量注入部分注入手动进样器的原理图装填状态液相色谱基础知识进样状态交叉污染的原因微量注射器红色表示残留样品手动进样法一般的方法1.在进样状态下清洗针口2.在装填状态下插入微量注射器3.注入样品4.切到进样状态手动进样法便捷的方法（不需清洗）1.进样状态下插入微量注射器2.切到装填状态3.注入样品4.切回到进样状态柱温箱分析结果重现性好提高柱效降低柱压保证检测稳定性液相色谱基础知识柱压低于150

8、kgf/cm2柱温在40℃左右，最高使用温度为50℃缓冲液PH使用范围为2～7流动相有机溶剂比例过低,柱效下降快返回ODS柱的使用注意点：硅胶在PH为3～4时稳定性最好碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳