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时间:2018-10-10
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1、抗人CCR5多克隆抗体体外阻断HIV-1假病毒的感染研究程林,唐娴,赵方,何美云,王辉(深圳市第三人民医院,广东深圳518112)摘要:目的制备鼠抗人CC型趋化因子受体5(CCchemokinereceptor5,CCR5)特异性HIV-1中和抗体。方法用稳定表达人CCR5的CHO-R5细胞腹腔免疫BALB/c小鼠;流式细胞术的方法分析免疫血清对GHOST-R5细胞的结合;纯化免疫血清总IgG抗体,HIV-1假病毒中和试验分析血清总IgG的中和活性。结果流式细胞术的结果显示,CHO-R5细胞免疫组小鼠血清对GHOST-R5结合的平均荧光强度显著高于对照
2、组(P<0.001);HIV-1假病毒中和试验的结果发现,纯化的CHO-R5细胞组小鼠免疫血清总IgG,可抑制HIV-1假病毒在体外感染GHOST-R5细胞,抑制作用具有剂量依赖性,最高抑制率达到92%。结论成功诱导出具有中和HIV-1活性的鼠抗人CCR5的多克隆抗体。关键词:CC型趋化因子受体5;中和抗体;艾滋病病毒1型中图分类号:R373.9文献标志码:A文章编号:1672-5662(2015)11-0000-00PolyclonalantibodiestohumanCCR5blocktheinfectionofHIV-1pseudotypedvi
3、rusinvitroCHENGLin,TANGXian,ZHAOFang,etal.(ShenzhenThirdPeople’sHospital,Shenzhen518112,GuangdongChina)Abstract:ObjectiveToprepareCCR5-specificHIV-1neutralizingantibodies.MethodsBALB/cmicewereintraperitoneallyimmunizedwithhumanCCR5stable-expressingCHO-R5cells;Thebindingofserafor
4、mimmunizedmicewithGHOST-R5cellswasanalyzedbyflowcytometry;theneutralizingactivityofpurifiedtotalIgGfromimmunizedmicetoHIV-1infectionwasdeterminedbyHIV-1env-pseudotypedvirusneutralizingassay.ResultsThemeanfluorescenceintensityofthebindingofGHOST-R5cellswithserafrommiceofCHO-R5cel
5、lsimmunizedgroupwassignificantlyhigherthanthatofthecontrolgroup(P<0.001)byflowcytometry;andtheneutralizingassayshownthat,totalIgGpurifiedfrommiceofCHO-R5cellsimmunizedgroupeffectivelyinhibitedtheinfectionofGHOST-R5cellsbyHIV-1pseudotypedvirusinadose-dependentmanner,withthehighes
6、tinhibitionratioof92%.ConclusionsSuccessfullyinducedmouseantihumanCCR5polyclonalantibodieswithHIV-1neutralizingactivity.Keywords:CCR5;Neutralizingantibody;HIV-1近年来,全球新发感染艾滋病病毒1型(humanimmunodeficiencyvirustype-1,HIV-1),人数和艾滋病死亡人数总体呈现下降的趋势。中国是疫情较为严重的国家之一,艾滋病仍是面临的重大公共卫生问题[1]。鼠抗人CC型
7、趋化因子受体5(CCchemokinereceptor5,CCR5)作为HIV-1主要的辅助受体,在病毒感染和传播过程中起关键作用[2]。本研究以表达人CCR5的CHO-R5细胞为免疫原,成功在小鼠体内诱导出具有中和活性的CCR5多克隆抗体,为开发靶向CCR5的HIV-1中和抗体奠定基础。1材料方法收稿日期:2015-05-28;修回日期:2015-08-19基金项目:国家“十二五”传染病重大专项(2012ZX10001009-001-001)SupportedbytheNational“TwelfthFiveYearPlan”InfectiousDi
8、seasesMegaProject(2012ZX10001009-001-001)作者简介:程
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