一种新微卫星page显带方法

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1、一种新的微卫星PAGE显带方法刘梦培1，田敏2，傅大立1*，傅建敏1，王彩霞2（1.国家林业局泡桐研究开发中心，河南郑州450003；2.中国林科院亚热带林业研究所，浙江富阳311400）摘要：文章提出了微卫星PAGE荧光染料显带法，并将其与琼脂糖凝胶荧光染料显带法与PAGE银染显带法进行了对比，结果发现该法分辨率高、快速高效、简单易行、背景清晰、兼具后两种方法的优点，是一种成功的DNA显带技术。关键词：微卫星DNA；聚丙烯酰胺凝胶电泳；荧光染料显影；银染AnewmethodofmicrosatellitePAGEbandingLIUMeng-pei1，TIANMin2，FUD

2、a-li1*，FUJian-min1，WANGCai-xia2（1.Non-timberForestryResearchandDevelopmentCenter，CAF，Zhengzhou450003，Henan，China；2.ResearchInstitute0fSubtr0picalForestry，CAF，Fuyang311400，Zhejiang，China）Abstract:ThispaperproposesmicrosatellitePAGEfluorescentimagingmethod,comparedwithagarosegelfluorescentimag

3、ingmethodandPAGEsilverstainingmethod,Theresultsshowedthatthemethodofhighresolution,fast,efficient,simpleclearbackground,boththeadvantagesofthelattertwomethods,isasuccessfulDNAbanding.Keywords:microsatelliteDNA；PAGE(polyacrylamidegelelectrophoresis)；Fluorescentimaging；silverstaining微卫星DNA又称简单

4、序列重复（simplesequencerepeats，SSR)，是由1-6个碱基多次串联重复组成的核苷酸序列，在基因组间广泛分布，具有共显性、重复性好、多态性高、扩增结果稳定、检测手段简便易行等优点[1]，成功应用在物种的遗传多样性（geneticdiversity）[2、3]、遗传图谱构建（geneticmapping）[4、5]、系谱分析（Pedigreeanalysis）[6、7]、遗传育种（GeneticsandBreeding）[8、9]等方面。微卫星DNA条带的鉴别常采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamidegelelectrophoresis，PAGE）

5、银染法，PAGE由Raymends和Weintraub1959年创建，具有不易扩散、灵敏度高、分辨率高等优点[10]。银染技术是其常用的显影方法，常用的有Bassam银染法[11]、Sanguinetti银染法以及在其基础上改良的一系列银染法，但银染法缺陷是步骤繁琐、耗时长、背景模糊、条带不清等，极易造成DNA条带错判，从而产生分析误差。许多研究者针对这些问题做了大量研究，但只能达到改良的效果，并不能从根本上解决问题。本研究提出了微卫星PAGE的荧光染料显影法，试图从一个新的思路解决PAGE显带的问题。1材料和方法1.1材料基金项目：国家十一五科技支撑项目资助（2006BAD0

6、1A1703-2）作者简介：刘梦培（1984—），女，中国林业科学研究院硕士研究生，研究方向：林木遗传育种。Email：mengpei0402@163.com＊通讯作者：傅大立，男，博士，中国林业科学研究院研究员，从事林木种质资源与遗传育种研究杏属不同品种幼嫩叶片；SSR引物UDP98-405，正向引物序列：5′-ACGTGATGAACTGACACCCA-3′，反向引物序列：5′-CCTACCGTCTCGTTTCTGAG-3′；GelRed核酸荧光染料。1.2PCR反应体系和程序PCR反应体系总体积20mL，其中10×PCRBuffer2.0mL、25mmol/LMgCl21.

7、2mL、10mmol/LdNTPsMiX0.4mL、5U/mLTaqDNA聚合酶0.3mL、10mmol/L的上下游引物各0.5mL、DNA模板0.5mL、ddH2O14.6mL。PCR反应在Bio-RadC1000TMThermalCycler型号的扩增仪上进行。ISSR扩增程序为94℃预变性5min，94℃变性45s，60℃退火45s，72℃延伸90s，35个循环，72℃延伸10min，4℃保存。试验于中国林科院亚热带林业研究所植物细胞工程实验室内完成。1.3琼脂糖凝胶电泳显带PCR产物