适用于小麦品质育种的一种a-page方法

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1、黑龙江农业科学2O10(10)：1～3HeilongjiangAgriculturalSciences◆生物技术◆适用于小麦品质育种的一种A—PAGE方法高崇婧。张延滨，李集临，姜焕焕。，赵海滨。，宋庆杰。，于海洋，张春利，辛文利，肖志敏(1．哈尔滨师范大学生命科学与技术学院，黑龙江哈尔滨150025；2．黑龙江省农业科学院作物育种研究所，黑龙江哈尔滨150086)摘要：为育种需要大批量地分析5+1O亚基龙麦19中对小麦品质有较大影响的醇溶蛋白块品系，利用双板夹芯式垂直槽，凝胶面积为182mm(宽)×95mm(高)，分离胶浓度为6，以甲酸为缓冲体系的不连续的酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳

2、(A—PAGE)来鉴定该醇溶蛋白块。结果表明：该系统可以较好地鉴定该醇溶蛋白块，具有简便、经济、高效、重复性好等特点，是适合于小麦育种过程中快速大量鉴定需要的一种A—PAGE电泳方法。关键词：小麦；品质；醇溶蛋白；近等基因系；A—PAGE中图分类号：S512文献标识码：A文章编号：l002—2767(2010)010—0001一O3小麦胚乳贮藏蛋白主要由麦谷蛋白(Glu—亚基受体和轮回亲本，以加拿大小麦品种Mar—tenins)和醇溶蛋白(Gliadins)组成，研究表明它quis为5+10亚基供体，通过6次回交然后自交们对小麦烘烤品质具有重要作用r1。]。在单向A—的方法在20

3、00年获得了带有5+10亚基的L一19PAGE条件下，一个品种可分离出15～30个组回交6代的品系L一19一D613(2，7+9，5+10)和分，而在双向电泳下可分离出多达5O个的组L一19-D626(2，7+9，5+10)。2002年吕晓波[1o]分[=1]。醇溶蛋白在小麦品种间存在明显差异，在龙麦19的HMw—GS近等基因系的研究中发其电泳谱带的多少及组合方式受基因型控制，几现，L一19-D613除5+10亚基外其它电泳谱带均乎不受环境的影响，因此被称为品种的指纹【5]，广与L一19相同。而L一19一D626比其姊妹系L一19一泛应用在品种登记注册、遗传标记育种等研究D613

4、多出3条来源于Marquis的醇溶蛋白谱带，领域]。初步判定L一19一D613和L一19一D626是一对醇溶蛋Metakovsky等发现一些醇溶蛋白组份(可多白近等基因系，通过对该近等基因系的品质分析，达9个)表现共同遗传的特点，杂交世代的分离象发现这3条醇溶蛋白特异谱带对很多品质参数的一个孟德尔性状，由共显性等位基因控制，称为醇作用为负向效应。溶蛋白遗传块(gliadinblock)_8]。每一醇溶蛋白任梓源等[1在后来的研究中发现，这3条特位点控制一组共同遗传的组份(gliadinblock)合异醇溶蛋白谱带是一个紧密连锁遗传的醇溶蛋白成，同一位点内的基因间极少发生重组。目前

5、已块，并且进一步证实了该醇溶蛋白块的存在对小在普通小麦中鉴定和命名了100多个醇溶蛋白等麦多项加工品质具有负向的遗传学效应。为在育位基因j。种过程中淘汰类似劣质醇溶蛋白基因，需要一种小麦品种龙麦19(L一19)，HMW—GS为2，适合于小麦育种大量鉴定工作的A—PAGE电泳方法。7+9，2+12，是黑龙江省农业科学院作物育种研究所1994年在黑龙江省推广的小麦品种，由于该1材料与方法品种不含5+10亚基，1995年利用L一19为5+101．1材料。供试小麦品种为龙麦19(L一19)及龙麦19回收稿日期：2Olo-08—04交6代的5+1O亚基品系L-19一D613(2，7+9，基

6、金项目：国家自然科学基金资助项目(30871525)第一作者简介：高崇婧(1983一)，女，黑龙江省哈尔滨市人，在5+10)和L一19一D626(2，7+9，5+10)，对照品种读硕士，从事小麦品质育种研究。为Marquis。通讯作者：张延滨(1957-)，男，硕士，研究员，从事小麦品质遗传及育种研究。E—mail：yanbin_zhang@163．corn。试验所用仪器为DYY-Ⅲ6C型电泳仪(北京1生物技术黑龙江农业科学10期六一仪器厂)、DYCZ一30型双板夹芯式垂直电泳麦品种是否带有L一19一D626中对小麦品质有较大槽(北京六一仪器厂)、德国Eppendorf5424型

7、离影响的醇溶蛋白谱带，有利于小麦育种过程中大心机、pH计(上海精密科学仪器有限公司批量地鉴定不同株系的醇溶蛋白构成。由于凝胶PHSJ～3F实验室)。凝胶面积为182Him(宽)x高度为95mm，所以电泳时间相对较短。而且单95mm(高)；样品梳为52齿，厚1．5mm。个样品所需的凝胶面积和缓冲液用量只有DY—1．2方法CZ一28B型1251Tim(宽)×200ram(高)的凝胶板醇溶蛋白A—PAGE方法参照张延滨等的方的1／5和1／7。可以节省制胶及染色过程中试验法，分离胶浓度(