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1、Ack1和SLP-2在胃癌组织中的表达和意义芦永福郜茜王昀青海大学附属医院消化内科青海丙宁810001基金项目:青海省(应用)基础研究计划项目2012-Z-727【中图分类号】R365【文献标识码】B【文章编号】1001—5302(2015)09-0709-02胃癌的发生是一个多因素、多步骤、多阶段的过程，其发病机制尚有许多未明之处.新近研究显示,Ack1的表达、激活与肿瘤的发牛.侵袭转移等过程相关[1].SLP—2是一种外周膜蛋白,张立勇[2傳发现SLP-2在食管癌等多种癌组织中高表达，可能是一个新的致癌基因.木组病例旨在
2、探讨SLP—2、Ack1在胃癌中的表达及意义.1材料与方法1.1一般资料选取青海大学附属医院2010-2015年间经胃镜并手术和病理确诊的胃癌患者90例，其中男性55例，女性35例，平均年龄50.14±3.27岁，收集同期非肿瘤手术标木30例为正常对照组.入选病例临床资料完整，术前均未接受化疗、放疗和生物治疗.1.2试剂SLP—2、Ack1多克隆兔抗人抗体均购自Sigma公司;mRNA提取试剂Trizol购自Ambion公司;RT2cDNAsysnthesiskit、RT2SYBRqPCRmix和引物的合成由Q
3、iagen提供.免疫组化试剂盒、DAB显色液和PBS购自武汉三鹰和博士德公司.1.3试验方法1.3.1real—timePCR严格按说明书操作,Ack1、SLP—2和18s的引物为美国Qiagen公司预制定量PCR专用引物.ABI5700型实时荧光定量PCR仪监测记录数据.ACt值=目的基因Ct值-内参基因Ct值,=ACt癌组织-ACt癌旁组织.1.3.2免疫组织化学染色采用即用型二步法免疫组化染色，按说明书进行染色，以PBS代替一抗作为阴性对照.1.3.3染色结果判定判定标准SLP-2阳性反应为细胞膜、细胞质呈黄色.根据染
4、色强度和阳性细胞数分为四个等级:无色0分、淡黄色1分、棕黄色2分、棕褐色3分.阳性染色的范围定义为:阳性细胞<1%为0分、1%~24%为1分、2549%为2分、50〜74°%为3分、75°%~100°%为4分.将上述两个独立的评分得分相乘得到该病例的染色系数,在本研宄中经统计学界定，将SLP—2的染色系数≥8定义为阳性(高表达),0—7定义为阴性表达.Ack1蛋白阳性反应为细胞质中呈棕黄色着色，无着色为阴性.阳性细胞数≤25%为1分,26%~75%为2分,>76%为3分，将胞质表达(0~1分)定义为阴性,(2〜3
5、分)定义为阳性.1.4统计方法采用SPSS16.0统计软件分析.计量资料数据以X±s表示,mRNA在胃癌和癌旁组织中相对表达采用非参数检验;三组间比较采用F检验，两组间比较采用t检验.2结果2.1SLP-2、AcklmRNA在胃癌和癌旁组织中的表达Ack1、SLP-2mRNA在胃癌组织中的表达高于癌旁，具有统计学差异(t值2.21,P<0.01),二者在正常组织中无表达;相关性分析显示二者在胃癌中的高表达具有明显正相关性(r=0.484,p<0.01).2.2Ack1、SLP—2蛋白在胃癌中的表达明显高于癌旁组
6、织(P<0.05)，两者在正常组织中无表达，其中Ack1蛋白阳性表达颗粒位于肿瘤细胞的胞质中,SLP—2蛋白阳性表达颗粒位于胞质和胞膜中，见图.2.3Ack1、SLP—2蛋白的高表达与肿瘤临床病理因素间的关系Ack1在胃癌中的高表达与肿瘤分化程度和临床分期相关(P<0.05),SLP—2的高表达与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移和局部浸润相关(P<0.05);二者均与性别、年龄、肿瘤发生部位及是否冇肝转移无关.表2SLP—2和Ack1蛋白在胃癌中高表达与胃癌临床病理因素之间的关系(X±s)图(×400
7、)Ack1表达：1胃癌组织中高表达,2癌旁组织中高表达;SLP—2表达:3胃癌组织中高表达,4癌旁组织中高表达3讨论Ack1是促进酪氨酸激酶生长的基因家族中的成员，具冇催化底物蛋白酪氨酸残基磷酸化、激活底物酶活性的功能[3].研究显示,Ackl与细胞增殖、黏附、细胞骨架重组及细胞吞饮等生物学行为相关，同时具有癌基因的作用，参与肿瘤的发生、侵袭、转移等过程[4、5].在鳞癌和乳腺癌中均高表达，与肿瘤的淋巴转移关系密切，高表达的患者预后差,与肿瘤转移能力相关[6].冋吋Ackl在晚期肿瘤中的表达高于早期肿瘤，提示Ackl在恶性肿
8、瘤的侵袭转移过程中起了很大作用[7].本组试验结果显示,Ack1的高表达与肿瘤临床分期和分化程度相关，中晚期肿瘤和恶性程度高者Ack1的表达量相对升高.SLP—2是stomatin家族的新成员，苏基因定位于9p13,1，具有家族共有的一致序列，但不具有N端跨膜区域,SLP—2具有N—十四(
