基因工程相关问题

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1、基因工程相关问题解析复兴中学车未艾问题一：关于克隆载体与基因表达载体（一）克隆载体用来克隆和扩增DNA片段的载体，具有3点特性：⑴能够在受体细胞复制；⑵带有药物抗性基因，便于筛选；⑶可导入受体细胞。（二）表达载体除具有克隆载体所具有的性质外，还带有表达构件——转录和翻译所必须的DNA顺序。是否含有表达系统元件，即启动子—核糖体结合位点--转录终止信号，这是用来区别克隆载体和表达载体的标志。克隆载体——pBR322质粒①4363bp②含一个复制点③含一个抗氨卞青霉素标记(ampR)④一个抗四环素标记(tetR)⑤ampR

2、和tetR基因内各有一些限制酶的酶切位点，供外源基因插入当外原基因插入抗药基因位点时，AmpR→Amp敏感(AmpS)、TetR→Tet敏感(TetS).真核生物基因表达载体表达载体模式图问题二：关于构建基因文库构建cDNA文库的步骤：提取某种生物发育某个时期的mRNA→反转录成互补DNA→与载体连接→侵染大肠杆菌→建立部分基因文库如何从基因文库中分离目的基因？1）探针序列来自基因产物蛋白质2）同源序列杂交问题二：关于构建基因文库分离目的基因的mRNA逆转录生成cDNA单链水解去除mRNA，合成cDNA双链水解回折处单

3、链得到平端双链cDNA导入宿主细胞克隆,构建cDNA文库GenBankflatfile:LOCUSDQ673108365bpDNAlinearPLN11-JUL-2006DEFINITIONHomaliodendronmicrodendron18SribosomalRNAgene,partialsequence;internaltranscribedspacer1,completesequence;and5.8SribosomalRNAgene,partialsequence.AUTHORSChe,W.,Du,G.an

4、dWu,P.TITLEDirectSubmissionJOURNALSubmitted(05-JUN-2006)Biology,CapitalNormalUniversity1acctgtgaacctgcggaaggatcattgcacacacgagttgcagccaacccgcggcgaacg61aacacattgtccctttcggtgggtcgtggcgccgcgcggcgtggcggccggccactccct121ttgtcgtcacgagctcgctcgcgcgcggcgttgggtttccacgcgatgc

5、cttcaccttga181ccgaatgactcagtccctcgacttcgtaggaggattgggagttccgtcccccttggcgcg241cttcgcttcttaagggggtgggcgtggttaccacccgaattgttaaaacgtaatccaaaa301caactctcagcaacggatatcttggctcttgcaacgatgaagaacgcagcgaaatgcgat361acgta例题分析（2009年天津）为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种

6、。下图是获取植酸酶基因的流程。据图回答：①图中基因组文库____________（小于/等于/大于）cDNA文库。②B过程需要的酶是______________；A、C过程中__________（可以/不可以）使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。③目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中___________和_____________为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是_______________________。问题三：关于重组DNA的检测（一）平板筛选（二）限制酶切图谱筛选（三）

7、PCR筛选重组体（四）分子杂交技术（一）平板筛选是指利用载体的遗传性标记直接筛选的方法。如具有抗药性标记的载体，转化宿主细胞后，能在含抗生素（Amp或Tet）的培养平板上生长；未转化的则不能生长。1插入失活当外源DNA序列插入质粒中某一抗药基因内，使该基因失活，转化细胞就不能生长在含相应抗生素的培养平板上。抗生素平板筛选（插入失活）例题分析：下图a示基因工程中经常选用的载体—pBR322质粒，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性。

8、为了检查载体是否导入原本没有Ampr和Tetr的大肠杆菌，将大肠杆菌培养在含氨苄青霉素的培养基上，得到如图b的结果（黑点表示菌落）。再将灭菌绒布按到图b的培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布平移按到含四环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）。据此分析并回答：与图c空圈相对应的图b中的菌落表现型是__