纳洛酮对帕金森病il

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1、纳洛酮对帕金森病IL【关键词】纳洛酮;IL-12P40;帕金森病　　Abstract:ObjectiveToevaluatetheeffectsofNaloxoneoncytokineinterleukin-12P40(IL-12P40)expressioninanimalmodelsofParkinsondisease(PD).Methods30SDratslydividedinto3groups,10ineachgroup.Thefirstgroup(PDgroup)oftenratsiparkinsonian

2、modelsinducedbyunilateralstereotaxicinfusionof6-hydroxydopamine(6-OHDA)inrightsubstantianigraofmid-brain.Everyinuteafterintraperitonealinjectionapomorphine.Iftheratsranmorethan6circleseveryminuteatthefourthodels.Thesecondgroup(Naloxonegroup)odelsealsalineasaco

3、ntrolgroup.Fromtheoperativesideinratsubstantianigra,animmunohistochemistry(IH)techniqueeasurementshoportantinterventionmechanismmaybeinfluencingtheexpressionofIL-12P40.　　Keyl/kg)腹腔注射麻醉，参照包新民主编的鼠脑立体定向图谱[5]，将大鼠固定在立体定向仪上。剪去头顶鼠毛，局部消毒，在正中从前向后切开大鼠头顶皮肤，分离颅骨表面的软组织，暴露右

4、侧顶骨。以前囟为坐标原点，选用右侧黑质定位坐标为：前囟后5.0mm，矢状缝右侧1.5mm，颅骨骨面下8.8mm。第一组(PD组)用微量注射器注入6-羟多巴(6-OHDA)18μg即3μl，注射速度为1μl/min，术毕留针10min，第二组(纳洛酮组)连续2天注入纳洛酮0.2mg，第3天注入6-OHDA3μl;第三组黑质内注入0.2g/100ml抗坏血酸生理盐水混合液3μl作为正常对照组。术后每周用阿朴吗啡诱发旋转30min至第4周旋转>6次/min者定为成功的PD模型。取鼠的术侧中脑黑质检测IL-12P40

5、的表达。　　1.2检测方法　　1.2.1IL-12P40表达的定性检测采用免疫组化(IH)法检测IL-12P40表达。首先石蜡包埋切片，片厚5μm，抗体购自Chemicon公司，严格按照试剂盒说明书操作。按1∶4000稀释，采用ABC法染色。每个标本在高倍镜下观察，随机取3个视野，计数IL-12P40阳性细胞数。　　1.2.2IL-12P40mRNA表达的原位杂交(ISH)检测地高辛标记的寡核苷酸探针及地高辛检测试剂盒购于武汉博士德公司，IL-12P40的ISH探针序列为:5’-GCACAGAGAGAAGAATGA

6、GTT-3’(大鼠);阴性对照:杂交液中不加地高辛标记的探针。严格按照试剂盒说明书操作，采用ABC法染色。每个标本在高倍镜下观察，随机取5个视野，计数IL-12P40mRNA表达阳性细胞数。　　1.3统计学处理　免疫组化、原位杂交采用德国KONTRONIBAS2.0全自动图像分析系统，SPSS12.0统计软件进行方差分析并进行两两比较。　　2结果　　2.1IH法检测IL-12P40表达与正常对照组比较，PD组IL-12P40阳性细胞表达量显著增多(P<0.01)。与PD组比较，纳洛酮组术侧黑质IL-12P40

7、阳性神经元数量明显下降(P<0.01)，见表1。　　2.2ISH检测IL-12P40mRNA表达与正常对照组比较，PD组IL-12P40阳性细胞表达量显著增多;与PD组比较，纳洛酮组显著减少。从mRNA水平说明PD时IL-12P40的表达增多，纳洛酮能够阻断IL-12P40的表达，见表1。表1三组两种检测方法IL-12P40阳性细胞计数与正常对照组比较，a：t=4.91,b：t=7.96，P均<0.01;与PD组比较，c：t=4.53,d：t=7.63，P均<0.01　　1989年，一项实验室的证

8、据发现细菌感染时或人EB病毒转染的B淋巴母细胞系可在内环境中产生一种因子，它能诱导IFN-γ生成，并激活自然杀伤细胞(NK细胞)，促进T细胞和NK细胞的生长，现在已被命名为IL-12[4]。IL-12是分子量为70kD(P70)的异源二聚体分子，由分子量分别为40kD(P40)与35kD(P35)的两条糖基链经二硫链连接组成。微生物、IFN-γ能促进IL-1