IL-23、IL-27对感染免疫的影响

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1、中文摘要lL-23、lL-27对感染免疫的影响摘要目的：IL．23、IL．27是近来发现的IL．12家族的细胞因子，具有调节T细胞、B细胞及NK细胞的活性及增强机体抗感染免疫等生物学功能，是亚单位疫苗的潜在佐剂。在本室前期研究中，制备了针对A族链球菌(GAS)及呼吸道合胞病毒(RSV)的疫苗，即GAS的亚单位疫苗及DNA疫苗：重组Fba蛋白与pcDNA3．1／foa质粒；RSV亚单位疫苗；重组G1F／M2蛋白。将两种疫苗分别以IL．23质粒及IL．27质粒为佐剂接种小鼠，观察IL．23和IL．27对

2、疫苗的免疫原性及保护性的影响，并进一步探讨其发挥作用的可能机制。方法：1．将pcDNA3．1／IL一23质粒、pcDNA3．1／IL一27质粒转染COS．7细胞行瞬时表达，Westernblot检测IL．23及IL．27的表达。同时转染pcDNA3．1／myc．HisB做为对照。2．大量提取pcDNA3．1／IL．23质粒、pcDNA3．1／IL一27质粒、pcDNA3．1／myc—HisB质粒及pcDNA3．1／fba质粒，诱导并纯化Fba蛋白和G1F／M2蛋白。3．动物实验：3．1GAS疫苗组的

3、动物实验：将雌性4周龄BALB／c小鼠随机分为6组，每组16只，分别为：pcDNA3．1／foa质粒+Fba蛋白组(简称GAS疫苗)、GAS疫苗+IL．23质粒组、GAS疫苗+IL．27质粒组、IL．23质粒组、IL．27质粒组、PBS对照组。Fba蛋白经皮下多点注射，质粒经肌肉注射进行免疫，共免疫4次，每次间隔10d。ELISA中文摘要检测各免疫组血清IgG的动态变化水平；末次免疫后10d，每组一半动物处死，行流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+、CD8+细胞的变化；NK细胞杀伤试验检测小鼠脾脏细胞杀伤

4、活性。每组的另一半动物给予链球菌攻击，以评价其对免疫小鼠的保护功效。3．2RSV疫苗组的动物实验：将48只雌性4周龄BALB／c小鼠小鼠随机分为8组，分别为：G1F／M2蛋I刍+AI(OH)3组、G1F／M2蛋t兰t+IL一23质粒组、G1F／M2蛋白+IL．27质粒组、G1F／M2蛋白+AI(OH)3+IL．23质粒组、G1F／M2蛋白+Al(0H)3+IL．27质粒组、G1F／M2蛋白+pcDNA3．1／myc—HisB质粒组、G1F／M2蛋白+PBS组、PBS对照组。G1F／M2蛋白经皮下多点

5、注射，质粒经肌肉注射进行免疫，共免疫3次，每次间隔10d。末次免疫10天后处死小鼠，ELISA检测各免疫组血清3免后特异性IgG、IgGl和IgG2a水平；流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+、CD8+细胞的变化；CTL杀伤试验检测小鼠脾脏细胞杀伤活性。结果：1．Western．blot证实IL．23质粒、IL一27质粒成功转染COS．7细胞并表达IL．23和IL．27。2．GAS疫苗组的动物实验2．1免疫后小鼠IgG水平逐渐增高，GAS疫苗组效价可达到1：12800、GAS疫苗+IL．23质粒组效价可达

6、到1：6400、GAS疫苗+IL．27质粒组效价可达到1：6400，三组间效价无显著差异。2．2流式细胞检测结果显示各组CD4+T细胞、CD8+T细胞水平均较对照组显著增高，其中IL．23质粒加入组CD4+T中文摘要细胞和CDs+T细胞水平显著高于其他组，IL．27质粒加入组CD4+T细胞水平显著高于GAS疫苗组，而CDs+T细胞水平与GAS疫苗组无显著差异。2．3体外NK细胞自然杀伤试验显示：GAS疫苗组、GAS疫苗+IL．23质粒组、GAS疫苗+IL．27质粒组杀伤率明显高于其他三组，而三组间无

7、明显差异。2．4链球菌攻击后，PBS组小鼠在2d内全部死亡，而GAS疫苗组、GAS疫苗+IL．23质粒组、GAS疫苗+IL．27质粒组、IL．23质粒组及IL．27质粒组、PBS组生存率分别为43．8％、49％、57．5％、25％、18．6％、1．4％，GAS疫苗+IL．23质粒组、GAS疫苗+IL．27组保护率较GAS疫苗组显著增高，两组之间无显著差异。GAS疫苗组高于IL一23质粒组和IL．27质粒组(P

8、亚单位疫苗的动物实验3．1免疫小鼠血清抗体效价结果显示与PBS组相比，G1F／M2+AI(OH)3、G1F／M2+AI(OH)3+IL-23以及G1F／M2+AI(OH)3+IL-27组均诱导了高水平的IgG、IgGl、IgG2a抗体(P