六味地黄丸对oletf大鼠胰腺凋亡相关基因bcl

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1、六味地黄丸对OLETF大鼠胰腺凋亡相关基因bcl薛耀明，罗仁，朱波，张燕，潘永华，李晨钟【关键词】糖尿病〔摘要〕目的：探讨六味地黄丸对自发性2型糖尿病大鼠胰腺组织凋亡相关基因bcl2和Bax表达的影响。方法：OLETF大鼠（自发性2型糖尿病）40只，随机分为六味地黄丸治疗组和模型组，每组20只；另同系LETO大鼠（非糖尿病）10只作为正常对照组。六味地黄丸治疗组于大鼠8周龄起，用六味地黄丸按2.4g・kg1・d1灌胃，余组用等量蒸馏水灌胃。每周记录大鼠体质量；采用口服葡萄糖耐量试验监测血糖；定期处死大鼠，分离胰腺并称

2、重；采用逆转录聚合酶链反应检测bcl2和Bax在胰腺组织中的表达。结果：大鼠40周龄时，六味地黄丸治疗组bcl2mRNA的表达水平为（1.25±0.07），较模型组（1.01±0.16）明显增高（P0.01）；BaxmRNA的表达水平为（0.57±0.11），较模型组（1.18±0.28）有明显降低（P0.01）。六味地黄丸治疗组的胰腺/体重比，较模型组增高，但差异无统计学意义。六味地黄丸治疗组的糖负荷能力明显高于模型组（P0.05或P0.01）。结论：六味地黄丸在转录水平可上调bcl2mRNA的表达，下调BaxmR

3、NA的表达，可能具有抗细胞凋亡的作用。　　〔关键词〕糖尿病,2型;凋亡;基因,bcl2;基因,Bax;六味地黄汤;大鼠,OLETF　　EffectsofLiualeOLETFratslydividedintoLaleLETOratsalcontrolgroup.OLETFratsintheLRNAerasechainreaction(RTPCR).Results:IntheLRNAinthepancreasofratsattheageof40uchhigherthanthatintheuntreatedgroup(1

4、.01±0.16),P0.01.BaxmRNAlevelintheLellitus,type2;apoptosis;gene,bcl2;gene,Bax;Liuafatty）大鼠及其同系非糖尿病LETO（LongevansTokushimaOtsuka）大鼠为研究对象，进行36周的实验观察，探讨了六味地黄丸对凋亡相关基因bcl2和Bax在大鼠胰腺组织中表达的影响。　　1材料和方法　　1.1实验动物和分组4周龄雄性OLETF大鼠40只和LETO鼠10只（日本大冢制药株式会社德岛研究所提供）。OLETF大鼠随机分为2组，

5、即六味地黄丸治疗组和模型组，每组10只。同系非糖尿病LETO大鼠10只作为正常对照组。　　1.2实验药物和仪器六味地黄浓缩丸，北京同仁堂制药厂产品；稳豪血糖仪及血糖试纸，美国强生公司产品；bcl2，Bax和3磷酸甘油醛脱氢酶（glyseraldehyde3phosphatedehydrogenase,GAPDH）引物由上海博亚生物技术公司合成。　　1.3动物饲养方法所有大鼠均在无特定病原体条件下单笼饲养，予以标准饲料喂养，自由取食和饮水。环境温度22～25℃，每12h光照与黑暗循环交替。　　1.4给药方法六味地黄丸加

6、入蒸馏水，搅拌加热后弃去沉渣，留汤液灌胃，浓度为0.6～0.8g/ml，按2.4g・kg1・d1灌胃，1d/次；模型组与正常对照组用等量蒸馏水灌胃，1d/次。　　1.5口服葡萄糖耐量试验实验前禁食15h，不禁水，按2g/kg予以30%葡萄糖溶液灌胃。采用剪尾法，于空腹时及糖负荷后30、60、90、120min时采血测血糖值（强生稳豪血糖仪）。　　1.6葡萄糖曲线下面积（areaunderthecurve,AUC）计算葡萄糖AUC＝（空腹血糖值＋餐后2h血糖值）/2＋餐后0.5h血糖值＋餐后1h血糖值＋餐后1.5h血糖

7、值　　1.7标本采集及指标检测每周称量大鼠体质量。于8、32和40周龄时分批处死大鼠，用3%戊巴比妥钠按1ml/kg予以麻醉，剖腹，分离胰腺，用滤纸吸干水分后称重，置于液氮中保存，待检。取胰腺组织20mg，用TRIzolReagent提取总RNA，在20μl反应体系中进行逆转录反应。反应产物用于聚合酶链反应扩增。bcl2退火温度58℃，34个循环，上游引物：5’GCTACGAGTGGGATACTGGAG3’，下游引物：5’GACAGCCAGGAGAAATCAAAC3’，扩增片段长度559bp；Bax退火温度52℃，3

8、2个循环，上游引物：5’CATCCAGGATCGAGCAGAGAG3’，下游引物5’AGCAAAGTAGAAGAGGGCAACC3’，扩增片段长度为262bp；内参照GAPDH退火温度58℃，34个循环，上游引物：5’CCTTCATTGACCTCAACTACATGG3’，下游引物：5’GCAGTGATGGCATGGACTGTGGT3’，扩增片段