类似人类老年糖尿病大鼠模型之形态学变化

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1、类似人类老年糖尿病大鼠模型之形态学变化：王晓宁高尤亮余文珍郑燕芳何才姑施红【摘要】目的采用D半乳糖加高脂高糖乳剂及链脲佐菌素(STZ)构建类似老年人糖尿病的大鼠动物模型，观察其胰腺形态学变化。方法选用健康).MethodsHealthyfemalemodelgroupobviouslydegranulated.ConclusionsTheadoptofintraperitonealinjectioninistrationodelilartotheoldpeopleDMbest.　　【Keyellitus;Experiment/animal

2、model;Dgalactose;Streptozotocin　随着人民群众生活水平的提高、老龄群体的扩大，老年糖尿病患病率亦随之大幅度增加〔1〕。因此，建立一种稳定的类似老年人糖尿病特点的动物模型对于研究老年糖尿病具有重要意义。本试验采用腹腔注射D半乳糖、给予高脂高糖乳剂30d后腹腔注射链脲佐菌素(STZ)，在继血生化角度阐述该模型基础上，进一步从形态学角度论证该衰老糖尿病大鼠动物模型的可靠性和可信性。　　1材料与方法　　1.1材料3月龄l·100g-1·d-1)40d，同时给予自由饮水及普通饲料。衰老模型组(B组)：参照《中药药理研

3、究方法学》(人民卫生出版社，1994版)，并参考有关文献〔2，3〕略加修改，将l/100g，1次/d)，连续40d。同时给予自由饮水及普通饲料。衰老糖尿病模型组(简称衰老糖尿病组C组)：同上述衰老模型大鼠制作条件，同时从第11d起灌胃高脂高糖乳剂(10%胆固醇、20%猪油、2%胆酸钠和30%蔗糖的高脂高糖乳剂，冰箱保存，使用时先于37℃水浴中融化)每日上午1次，连续30d后，腹腔注射STZ(STZ现配现用，冰浴条件下，用pH4.2柠檬酸缓冲液配成0.25%溶液。体重<200g者按30mg/kg体重，>200g者按体表面积进行计算

4、)。4d后，筛选禁食不禁水12h后血糖≥11.1mmol/L为衰老糖尿病成模鼠〔4〕。其余饲养条件同正常对照组。上述各组大鼠再继续灌胃生理盐水10d后，麻醉，取1/5胰腺组织保存于甲醛和Lille液中，行免疫组化、TUNEL、HE染色和电镜观察。　　1.2.2观察方法一般状况观察:包括大鼠饮水量、进食量、排尿量、精神状态、毛色及活动情况，每周测1次体重。　　1.2.3指标检测　　1.2.3.1免疫组织化学法检测大鼠胰腺细胞凋亡、iNOS的表达(1)免疫组织化学法(SABC)检测大鼠胰腺细胞凋亡、iNOS的表达〔4，5〕;(2)结果判定采用D

5、AB染色法：①细胞核中呈现棕褐色颗粒者，为染色阳性的凋亡细胞;②胞浆棕黄染色者为iNOS阳性;(3)结果观察：①凋亡细胞观察：每例切片高倍视野(×400)下连续计数10个网格染色阳性的凋亡细胞数，作为胰腺组织凋亡细胞数。②iNOS蛋白观察：每例选1个胰岛，400倍镜下摄像，并采用形态学图像分析系统1.0计算胰岛正常染色的平均积分灰度值=∑(面积×平均灰度)/∑面积，iNOS蛋白表达的积分光密度A值=∑(面积×平均棕黄染色光密度A值)/∑面积。　　1.2.3.2光镜观察大鼠胰腺组织形态变化取胰腺，用10%甲醛液固定，常规石蜡包埋切片，HE染色

6、。每例选取一张切片，100倍光镜下，连续计数10个视野的胰岛数目并量取胰岛的长度、宽度，以计算胰岛总面积。　　1.2.3.3电镜观察大鼠胰腺组织超微结构变化取1mm3大小胰腺，经固定、漂洗后固定漂洗、脱水、浸透、包埋、聚合、切片、染色等步骤，在日立Hu12A型透射电镜下观察并摄片。　　1.3统计学分析数据以x±s表示，方差齐者用t检验;方差不齐者用t′检验;采用SPSS11.5统计软件进行统计分析。　　2结果　　2.1一般状况观察正常对照组大鼠饮食饮水(进食量14g·只-1·d-1，饮水量42ml·只-1·d-1)及大小便、活动正常，4l

7、·只-1·d-1)，给予高脂高糖乳剂4l·只-1·d-1)，活动减少，体毛松散，精神萎靡，无死亡，5只大鼠血糖不合标准被剔除，成模率达80%。　　2.2各组大鼠胰腺组织细胞形态学变化　　2.2.1各组大鼠胰腺组织细胞凋亡数、胰岛iNOS表达变化由图1、表1可见，正常对照组胰岛呈团索状，境界清晰，岛内细胞呈圆型，胞浆丰富，核圆居中，胰岛周围腺泡细胞散在分布少量凋亡细胞，400倍镜下，平均凋亡细胞数为1～3个。衰老模型组胰岛数量减少，胰岛边界尚清晰，岛外腺泡细胞可见到一定量凋亡细胞，400倍镜下平均7～12个。衰老糖尿病模型组胰岛数量和面积明显

8、减少，甚至较难找到，而胰岛周围腺泡细胞可见到大量凋亡细胞，400倍镜下，平均(23±8)个。由图2可见，正常对照组胰岛内仅有少量细胞可见到胞浆浅淡色棕染的iNOS，彼此未融合。衰