糖尿病早期大鼠坐骨神经形态学实验探究.doc

《糖尿病早期大鼠坐骨神经形态学实验探究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、糖尿病早期大鼠坐骨神经形态学实验探究【摘要】研究糖尿病早期大鼠周围神经形态学变化，为糖尿病周围神经病变动物模型的确立提供客观依据。方法：采用链腺佐菌素（STZ）诱导大鼠建立糖尿病模型（DM）,光镜及电镜下观察大鼠6周末坐骨神经病理形态学变化，并对坐骨神经横切面进行定量分析。结果：DM大鼠6周时坐骨神经出现明显的病理损害。光镜下见坐骨神经有髓鞘神经纤维空泡样变性、轴索肿胀。电镜下见严重脱鞘改变。病理图像分析结果与电镜结果相符。结论：STZ诱导大鼠早期已出现明显的周围神经损害，符合糖尿病周围神经病变（DPN）的病理特点，说明DPN模型建立成功。【关键词】糖尿病；大鼠；周围神经病变Ab

2、stractObjective：Totheperiphera1neriabeticraearlystage,inorderprofformoderiphera1neurophathy・Methods：ThemodelsofratswereinducedbyStrepotozotocin(STZ).After6weeks,thehistomorphometryofsura1nervewasana1ysedwithlightmicioscopeandelectronmicroscpe•Resutrieanashowedtherattheantfewerthatnorgroup(P01

3、)・Cone1usiPeripherneuroSTZinduceddiabpearedintheearlycorrespondedwithttomorphometryperipheralmodItcertifiesthate1ofdiabeticperneurophathyKeywordsdiabetesme11itus；rat；peripheralneurophathy为了研究早期糖尿病（DM）大鼠坐骨神经形态学的改变,我们采用链腺佐菌素诱导大鼠建立糖尿病模型，观察DM大鼠6周末坐骨神经病理形态的变化，为糖尿病周围神经病变动物模型的确立提供科学依据。1材料与方法1.1材料1.1

4、.1主要仪器（1）日本JEM100CXII型透射电镜；（2）德国罗氏公司Accu-CHEK型电感血糖仪；（3）德国LEICARM2135型精密轮转切片机；（4）北航CMIASWINSYSTEM多功能真彩色病理图像分析系统。1.1.2主要药品链腺佐菌素（STZ）购于北京邦定泰克生物制药有限公司（美国Sigma公司）。1.2方法1.2.1动物模型的建立及分组健康清洁级（SPF级）SD雄性大鼠20只，体重为（220±20）g,购于北京维通利华实验动物有限责任公司。适应性喂养1周后，按体重层次随机取10只为正常对照组，10只为造模组。用0.1mmo1/L无菌枸椽酸缓冲液(pH=4.2,4

5、°C),将STZ配成2%的溶液，大鼠禁食10h后，按53mg/kg腹腔注射，72h后测定血糖大于16.65mmo1/L者列入观察对象；正常对照组正常喂养。1.2.2标本采集实验至第6周结束，腹腔注射20%乌拉坦麻醉大鼠(0.4m1/100g),分离双侧坐骨神经，一侧神经用10%甲醛固定待作光镜；另一侧坐骨神经置2.5%戊二醛中待作电镜。1.2.3光镜及电镜标本的制作光镜标本：取10%甲醛固定的坐骨神经用水洗，1%餓酸染色，常规脱水、石蜡包埋，德国LEICARM2135型精密轮转切片机连续切片，厚5nm,在40X10倍视野下观察其横切面及纵切面病理变化。电镜标本：取1mm2大小2.

6、5%戊二醛(0.05mmo1/L)固定的坐骨神经组织，用1%餓酸固定，Epon812包埋，超薄切片，乙酸双氧铀和枸椽酸铅双染色，乙醇丙酮梯度脱水，JEM100CXII型透射电镜观察有髓鞘神经纤维脱髓鞘及胞质等病理改变并摄片。1.2.4检测指标及方法血糖测定：分别于疗前及实验结束后，用罗氏公司生产血糖仪测定血糖。坐骨神经病理图像分析：每例组织测定一组神经，测定参数为有髓神经纤维平均截面积、有髓神经纤维周长、有髓神经纤维密度等。1.2.5统计学方法各组数据均用x±s表示，组间比较采用单因素方差分析，F检验，用SPSS10.0版统计软件处理。2结果与分析2.1大鼠血糖变化(表1)表1各

7、组大鼠疗前及疗后血糖的变化比较(略)注：与正常对照组比较1)P<0.01；与疗前比较2)P<0.01表1示DM大鼠血糖与正常组比较明显升高(PV0.01)oDM组疗后血糖与疗前比较有明显升高(P<0.01),说明随病程延长，糖尿病大鼠血糖有增高趋势。2.2坐骨神经病理图像分析结果(表2)表2坐骨神经病理图像分析结果显示：与正常对照组相比，糖尿病模型神经纤维平均截面积略增大、有髓鞘神经纤维密度减少，轴索平均周长较正常组增大(P<0.01)o表2各组大鼠坐骨神经有髓鞘神经纤维病理图像