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1、吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色AO/EB原理与流程zhongyisheng:1原理：吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。溴乙锭(E仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。二者形态迥然相异，很易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；非
2、凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状。2AO/EB染色及观察结果：取20-100μl的1：100稀释的染色剂置于载玻片的贴壁细胞上室温下静置20min，PBS洗涤2-3遍，上覆盖玻片，荧光显微镜下观察结果并计数20-200个细胞。ym1051:1.能否提供具体实验步骤?2.您在文中所说的"1：100稀释的染色剂"是怎样稀释的?如何在载玻片上种上贴壁细胞?zhongyisheng:1用1mlEP管稀释时，先取微量的染色剂，然
3、后再取稀释剂（如BSA）加入EP管吹打即可。2消毒灭菌处理后的盖玻片平放入培养皿或中即可实验。ym1051:我好像已明白具体过程了:首先要进行细胞爬片,然后将染色剂滴加在已爬有细胞的盖玻片上,温育后洗涤,再盖上盖玻片则可进行观察了.是这样吗?如果不经过爬片处理而将细胞进行消化,再将细胞和染色剂滴加在盖玻片上进行观察,行吗?zhongyisheng:的确，不经过爬片而是将贴壁细胞消化下来一样可以进行进一步的实验。这是悬浮细胞的典型方法。当然，由于进行免疫组化染色进行的形态学检查经常考虑到细胞的原貌，在
4、国际上比较通用，尤其是在进行动态检查时。医琳师妹：我将我所作的方法与大家共享：吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡（acridineorange/ethidiumbromide,AO/EB）：1）细胞爬片：在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液，干预后，予95%乙醇固定15分钟，微干，然后准备荧光染色。将100mg/L溶于PBS的吖啶橙和100mg/L溶于PBS的溴化乙锭各5μl（临用前混合加入，加样量宜小，有时各2μl-5μl足够，量太大容易形成细胞凋亡的假阳性），在照相前混匀后
5、加入，轻轻吹打，30秒后用激光共聚焦显微镜观察照相。（有人用15mg吖啶橙溶于100mlpH6.8的PBS中过滤，避光保存）计取5个视野，共100个细胞中凋亡细胞百分数。2）如制成细胞悬液：取100μlPBS稀释的细胞悬液，加2μl的染色液，其中AO/EB，各含100μg/ml，加入染料30秒后观察摄像。（有人用PBS配制吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）混合液，各含100μg/ml。细胞离心，悬液于PBS中，取100μl细胞悬液加4μl荧光染色液，轻轻吹打，滴至载玻片上，加盖玻片后立即置荧光显微镜下观
6、察。）fffwu:请问:请评价AO/EB法观察细胞凋亡的方法!哪里有相关图片!jmtang:尤其第一篇文献！1、Criticalevaluationoftechniquestodetectandmeasurecelldeath–studyinamodelofUVradiationoftheleukaemiccelllineHL60MarinaLeiteA1,MargaridaQuinta-CostaA1,PedroSimasLeiteA1,JoséEduardoGuimarãesA1A1IPATIM
7、UP,InstitutodePatologiaeImunologiaMoleculardaUniversidadedoPorto,PortugalAbstract:Thereliabilityofeightdistinctmethods(Giemsastaining,trypanblueexclusion,acridineorange/ethidiumbromide(AO/EBdoublestainingforfluorescencemicroscopyandflowcytometry,propid
8、iumiodide(PI)staining,annexinVassay,TUNELassayandDNAladder)fordetectionandquantificationofcelldeath(apoptosisandnecrosis)wasevaluatedandcompared.Eachofthesemethodsdetectsdifferentmorphologicalorbiochemicalfeaturesofthesetwoprocesses.The
