曲安奈德抑制bn大鼠脉络膜新生血管生长

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1、曲安奈德抑制BN大鼠脉络膜新生血管生长【摘要】目的：观察光凝后即刻玻璃体腔内注射曲安奈德(triamcinoloneacetonide,TA)对BN大鼠脉络膜新生血管(choroidalneovascularization,V)生长的抑制作用机制。方法：健康BN大鼠36只随机分为两组，随机抽取一眼作为实验眼。建立BN大鼠V动物模型。光凝后的即刻行玻璃体腔内注射TA8μL(320μg)，对照组则在光凝眼行玻璃体腔内注射BSS8μL。分别在光凝后1，2，4cinoloneacetonide(TA)injectionafterphot

2、ocoagulation,andtostudythemechanismofinhibitionofVgrolytotlyasexperimentaleye.AfterestablishingBNratVmodel,8μL(320μg)TAmediatelyafterphotocoagulationintreatmentgroup,thesamevolumeisotonicbalancedsaltsolution(BSS)onocytechemoattractantprotein1(MCP1),factorⅧrelateda

3、ntigen(FⅧRAg)inedbyimmunohistochemicalmethod,andthetranscriptionofvascularendothelialgroRNA(VEGFmRNA)inedbyinsituhybridization,meaniquantitativeanalysisentgroup,thepositivestainopticaldensityofNFκB,MCP1,FⅧRAg,andVEGFmRNAporaneouscontrolgroup(P<0.05).CONCLUSI

4、ON:TAcanloRNAtranscriptionandtheproteinexpressionofNFκB,MCP1andFⅧRAg,soitcaneffectivelyinhibitthedevelopmentofBNratV,cinoloneacetonide;choroidalneovascularization;nuclearfactorkappaB;monocytechemoattractantprotein1;vascularendothelialgroageProPlus5.1图像分析系统(美

5、国Mediacyberics公司)。TA注射液(1mL:40mg)(昆明积大制药有限公司);兔抗人FⅧRAgmAb(北京中杉金桥生物技术有限公司);兔抗大鼠MCP1多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司);小鼠抗大鼠的NFκBmAb0.1mL(北京中杉金桥生物技术有限公司);即用型SABC试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);SP9002免疫组化染色试剂盒;VEGF原位杂交检测试剂盒。　　1.2方法健康雄性BN大鼠36只，体质量200～220g，随机分为两组，实验组和对照组。复方托品酰胺滴眼液双眼散瞳，左下ip100g/

6、L水合氯醛溶液3.0mL/kg麻醉，检查双眼前节和眼底均正常。随机选取1眼作实验眼，滴10g/L甲基纤维素后，依照赵世红等[2]的方法建立V动物模型，另1眼不光凝为正常眼。全身麻醉状态下，丁卡因滴眼液表面麻醉后，手术显微镜下，30G针头颞侧角膜缘后0.5mm作一穿刺口，微量注射器从穿刺口进针，大约为1.5mm深，针尖朝向视神经方向，玻璃体中可见针尖，缓缓注入TA8μL(320μg)，由散大的瞳孔可观察到玻璃体中TA的白色混悬液体，轻轻拔针后，显微镊子轻夹穿刺口片刻，以利穿刺口闭合。对照组BN大鼠玻璃体内注射同样容量的等渗的BSS

7、液。因注射造成晶状体损伤的眼均被排除实验。光凝后在1，2，4ol/LPBSDEPC液中固定2h。按病理组织学方法梯度乙醇脱水、透明、浸蜡、包埋，蜡块4℃保存备用。眼球组织5μm厚度连续切片，置于50℃DEPC处理过的蒸馏水中展片，捞片，置烤箱37℃烤片12h后，4℃保存，备用做HE染色、免疫组化及原位杂交检测。　　1.2.1MCP1，NFκB及FⅧRAg表达的检测石蜡切片，常规脱蜡至水;30mL/LH2O2室温孵育10min，阻断内源性过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗，PBS浸泡5min;切片置于盛有0.01mol/L枸橼酸盐

8、缓冲液的抗原修复盒中，微波中火加热15min进行抗原微波炉热修复，自然冷却30min;滴加50g/LBSA封闭液，室温20min。滴加一抗兔抗大鼠MCP1多克隆抗体(1∶70)，4℃过夜;滴加生物素化山羊抗兔IgG(二抗)，37°C孵育20min;滴加SABC