兽医微生物18

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1、猪瘟病毒Lecture18概述猪瘟（Classicalswinefever，CSF或Hogcholera，HC)俗称“烂肠瘟”，美国称猪霍乱，英国称猪热病，欧洲一些地区的人称其为古典猪瘟，这是为了与非洲猪瘟区别。它是一种急性、热性和高度接触传染的病毒性传染病。其特征是发病急，高热稽留和细小血管壁变性，引起全身泛发性小点出血，脾梗死。猪瘟病毒的分类地位及特性猪瘟病毒（CSFV或HCV）是黄病毒科（Flaviviridae)瘟病毒属(pestivirus)的一个成员。病毒粒子直径40-50nm，有囊膜。基因组为单股RNA

2、，约12.3-12.5kb。CSFV与牛病毒性腹泻（BVDV）和羊边界病病毒（BDV）同源性为30%(aa)，在血清学上有交叉反应性。CSFV的基因组结构猪瘟病毒的基因组为单股线状正股RNA，具有感染性。5'端为非甲基化帽结构，3'端无多聚腺苷酸尾，大小约为12.3-12.5kb。整个基因组按编码与否大致分为三部分，两头分别为5'端非编码区（5'-nocodingregion)和3'端非编码区（3'-nocodingregion)。5'-NCR区长360-374个碱基，3'-NCR区长243-272个碱基。已知序列的

3、不同毒株在这两个区域的碱基长度有差异。这两部分序列参与启动、调控病毒蛋白质的转录、翻译及病毒的复制过程。CSFV的基因组结构（续一）基因组中部为编码区，已知序列的各毒株在编码区的碱基数目相同，均为11697个碱基，由一个连续的大开放阅读框构成，理论上可编码一个由3898个氨基酸残基组成的多聚蛋白。这个多聚蛋白在病毒感染的宿主细胞内可裂解为十二种病毒特异性蛋白质，其中C、E0（Erns）、E1、E2四种为病毒结构蛋白，P7、Npro、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B八种为非结构蛋白。CSFV的基因

4、组结构（续二）基因产物沿ORF的顺序为NH2-(Npro-C-Erns-E1-E2-P7-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B)-COOH，其中Erns、E2（特别是E2）最具有免疫防制研究价值。其中C为核衣壳蛋白,E0（Erns）、E1、E2为结构糖蛋白。其余为非结构蛋白。CSFV的基因组结构（续三）CSFV的基因组结构（续三）E0（或Erns）的N末端为Glu-268，它由227个aa组成，其甲基化程度很高，分子量约为44-48KD，可诱导中和谱很窄的中和抗体。E0不仅是一种结构蛋白，而且是一种

5、功能性蛋白。它与CSFV对宿主细胞的嗜性以及致病力有密切关系。E0在CSFV感染过程中的作用E2在CSFV感染过程中的作用E2的N端为Arg-690，分子量为53-55KD。E2参与病毒对细胞的感染过程，携带有能刺激机体产生保护性免疫的抗原决定簇。E2基因编码的gp55蛋白是猪瘟的主要保护性抗原。从N端693和737位Cys形成二硫键并组成一个序列特异性（易变）抗原结构域，且有中和性的B、C抗原区位于该结构域中。E2在CSFV感染过程中的作用（续）另一个结构域属序列保守性（不易变），由792和856位Cys形成的二硫

6、键组成，包含中和抗原区A和非中和抗原区D，而A和D区由其间的一个疏水区和818位、828位Cys形成的二硫键分开。在A、B、C三个中和区域中，各有一段与中和性密切相关的高频突变序列或位点，这些序列或位点的突变株将逃脱中和性单抗的中和作用，免疫血清对这类突变株的中和作用也会降低。CSFV的全长感染性cDNA的研究进展Moormann等（1996）以猪瘟疫苗株C株正链RNA的全长cDNA为模板，转录出了感染性RNA。用E2单抗即可将两者区分。另外，可以推测，pPRKflc-133可作为生产中标记猪瘟疫苗毒株的极好工具，并

7、进一步用于CSFV复制、毒力和宿主嗜性等方面的研究。Meyers(1996)等在测定了CSFV5´和3´端序列后，构建了CSFV全长cDNA克隆。将由cDNA体外转录得到的RNA转染猪肾细胞后，复活了感染性的CSFV。CSFV的全长感染性cDNA的研究进展（续一）CSFV的全长感染性cDNA的研究进展（续三）Moser（2000）等将编码细胞氯霉素乙酰转移酶（ACT）基因插入到CSFVAlfort/187株全长cDNA克隆pA187-1的Npro基因中，并获得转染成功，转染细胞中的CAT保留了CAT的酶活性。所以，标

8、记病毒vA187-CAT是病毒复制的定量分析和基因表达，也是标记疫苗种毒和开发诊断试剂盒的有效工具。CSFV的分群CSFV不同毒株间存在显著抗原差异，可根据对单抗的反应、测序比对结果对CSFV进行分群。1999年，Sadoda就通过对40余株猪瘟流行毒的序列分析，将猪瘟病毒病毒分为3个群：①CSFV-1，称为古典猪瘟，以Brescia株为代表。