耐药机制及检测方法

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1、MRSA耐药机制及检测方法府伟灵第三军医大学附属西南医院检验科overviewMRSA，methicillinresistantStaphylococcusaureus（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）1961年在英国由Jevons首次发现，是引起医院感染的重要病原菌之一overviewMRSA是携带mecA基因、编码低亲和力青霉素结合蛋白，导致耐甲氧西林、所有头孢菌素、碳青霉烯类、青霉素类+青霉素抑制剂抗生素的葡萄球菌感染多发于免疫缺陷患者、老弱患者及手术、烧伤后患者，极易导致感染暴发流行、治疗困难，病死率高overview不均一耐

2、药性MRSA菌落内存在敏感和耐药两个亚群，即一株MRSA中只有一小部分细菌约10－4～10－7，对甲氧西林高度耐药，在50μg/ml甲氧西林条件下尚能生存，而菌落中大多数细菌对甲氧西林敏感，在使用抗生素后的几小时内大量敏感菌被杀死，但少数耐药菌株却缓慢生长，在数小时反又迅速增殖。overview广谱耐药性MRSA除对甲氧西林耐药外，对其它所有与甲氧西林相同结构的β-内酰胺类和头孢类抗生素均耐药，MRSA还可通过改变抗生素作用靶位，产生修饰酶，降低膜通透性产生大量PABA等不同机制，对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、氟喹喏酮类、

3、磺胺类、利福平均产生不同程度的耐药，唯对万古霉素敏感。overview生长特殊性MRSA生长缓慢，在30°C，培养基pH7.0及高渗(40g/LNaCl溶液)条件下生长较快。在30°C时，不均一耐药株表现为均一耐药和高度耐药，在37°C又恢复不均一耐药。均一耐药株在＞37°C或pH＜5.2时，均一耐药性可被抑制而表现为敏感。增加NaCl浓度，低温孵育和延长时间，可使不均一耐药株群体中敏感亚群中的耐药性得到充分表达，即能耐受较高浓度的甲氧西林，而对其中耐药亚群无影响。但最近也有报道，高渗下延长培养时间，会影响MRSA的检出结果。因

4、为在高盐情况下，培养48h，对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(methicillinsensitiveStaphylococcusaureus，MSSA)易产生大量β-内酰胺酶，可缓慢水解甲氧西林，导致细菌生长，而误认为MRSA。所以一般MRSA在高盐环境孵育24h，而耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)由于耐药亚群菌数少于金葡菌，应孵育48小时观察结果。overview鉴于该菌对目前临床上所使用的抗生素大多数有很高的耐药率和多重耐药性,除对甲氧西林耐药外,对绝大多数β-内酰胺类抗生素呈交叉耐药,并可对氨基糖甙类、大环内酯类

5、等常用抗生素产生多重耐药，极易引起感染的爆发流行，给临床治疗带来极大的困难，因而成为世界关注的难题Epidemicstatus全球：1993年，日本Kansai医大附院MRSA分离率为41%1999年，英国30个监测中心MRSA检出率最高为56.7%1999年，根据美国疾病控制中心(CDC)统计，全美重症监护病房MRSA感染率为52.3%Epidemicstatus中国：自70年代发现有MRSA以来，近几年MRSA的检出率正在逐年上升1989年，上海地区MRSA的分离率为60%，1996年激增至72%1999-2001年，重庆地

6、区MRSA分离率为65.1%ResistancemechanismPBPs青霉素结合蛋白（penicillinbindingproteins,PBPs)，由金黄色葡萄球菌自身合成普通的金黄色葡萄球菌合成五种与β－内酰胺类抗生素亲和力较高的PBPs，包括PBP1、PBP2、PBP3、PBP3’和PBP4ResistancemechanismPBPs参与细菌细胞壁合成的转肽酶、羧肽酶和内肽酶,催化糖肽交叉联接反应，对细菌的生长繁殖起着极其重要的作用β-内酰胺类抗生素与PBPs共价结合后，PBPs失去活性而阻断细胞壁的合成,导致细菌死

7、亡ResistancemechanismMRSA染色体中含有mecA基因，另外合成一种分子量为78kD的与β-内酰胺类抗生素亲和力较低的青霉素结合蛋白，因其电泳率介于PBP2与PBP3之间，故称为PBP2a或PBP2′PBP2a蛋白属高分子量PBP（78kD）,具有与高亲和力PBPs相同的青霉素结合基序，而结合能力却很低，当MRSA中高亲和力PBPs结合β-内酰胺类抗生素失活后，PBP2a可代替PBPs，维持细菌的生长和存活，从而使MRSA表现出耐药性mecA基因mec即甲氧西林耐药决定因子，是整合到葡萄球菌上的30～50kb的

8、外来插入片段，其中mecA基因是PBP2a的编码基因，是MRSA的主要耐药基因mecA基因存在于MRSA和部分凝固酶阴性葡萄球菌(coagulasenegativestaphylococci,CNSorCoNS)中，mec片段末端存在末端反向重复序列，且均插入到