葛根素对低o2高co2肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体途径凋

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1、葛根素对低O2高CO2肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体途径凋【摘要】目的:研究在慢性低O2高CO2情况下，葛根素对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)线粒体途径凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠40只，随机分为正常对照组(N组)、慢性低O2高CO22周组(H2PAP、RV/(LV+S)、PAMT、PASMCs胞浆Bcl-2含量均显著高于N组（P<0.01），Cyt-c释放量、Bax含量及肺组织匀浆caspase9酶活性均显著低于N组（P<0.01）；H2PAP、RV/(LV+S)、PAMT、肺弹力型动脉和肺微细动脉PASMCs中Bcl-2含量均显著低于H4itochondr

2、ial-dependentapoptosispathnaryhypertensioninducedbyhypoxichypercapnia.Methods:FourtySprague-Dalydividedintofourgroups:normalcontrolgroup(N)，hypoxichypercapnic2mitochondriaandthecontentofBcl-2andBaxincytoplasminedmunohistochemistry.Theactivityofcaspase9etricmethod.Results:①ThemPAP,RV/(LV+S),PAM

3、TandthecontentofBcl-2ofPASMCsofgroupH2onaryelasticarteryandpulmonaryarterolesofgroupH4PAP，RV/(LV+S)，PAMTandthecontentofBcl-2inpulmonaryelasticarteryandarterolesofgroupH4onaryelasticarteryandpulmonarymusculararteryandtheactivityofcaspase9oflungingroupH4onaryhypertensionandinhibitstructuralremod

4、elingofpulmonaryarteries.Facilitatingmitochondrial-dependentapoptosisofPASMCsmaybeoneofthemechanismsofthisaction.Keyonary；mitochondria；apoptosis；Puerarin低氧性肺血管重建中各种类型细胞凋亡减少而增殖增加[1]。肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryar-terysmoothmusclecells，PASMCs)是肺血管壁的主要组成部分，增加PASMCs凋亡可以逆转肺动脉高压肺血管重建[2]。细胞色素C(cytochromeC，Cyt-

5、c)从线粒体中释放是细胞线粒体途径凋亡的关键步骤[3,4]。线粒体Cyt-c的释放受到Bcl-2蛋白家族的调控，Bcl-2和Bax蛋白是该家族中具有代表性的蛋白，分别起到抑制和促进凋亡的作用[5,6]。葛根素(Puerarin)是豆科植物野葛干燥根中的主要有效成分,大量研究发现，葛根素能促进主动脉平滑肌细胞的凋亡[7]。本实验拟通过研究葛根素对PASMCs线粒体Cyt-c释放、caspase9活性以及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，探讨葛根素促进PASMCs线粒体途径凋亡是否为其抑制肺动脉高压肺血管重建的作用机制。1材料和方法1.1材料1.1.1实验动物：雄性Sprague-Da

6、mPRESSREAGENTAnti-RabbitIg多聚过氧化酶二抗(加拿大VectorLaboratories公司产品)，caspase9活性检测试剂盒。Bradford蛋白浓度测定试剂盒（江苏碧云天生物技术研究所产品）。其余均为市售分析纯。1.2方法1.2.1动物模型制备：大鼠40只，随机分为对照组(N组)、慢性低O2高CO22周组(H2g/kg体重，郑州羚锐制药有限公司产品，生产批号：0601022)，其条件同H4PAP）、平均颈动脉压力(mCAP)及右心室重量比(RV/(LV+S)%)、中膜厚度(PAMT)的测定：采用右心导管法[8]测量、计算mPAP，颈总动脉插管测mCA

7、P。分离右心室（RV）和左心室（LV）+室间隔（S），滤纸吸水分后分别称重，计算两者的比值RV/（LV+S）。每只大鼠取1张肺组织HE染色切片，每张切片随机选取不同直径(20～200)μm肺动脉各6支，Image-ProPlus6.0软件测定肺肌型动脉和肺弹力型动脉内中膜厚度(PAMT)。1.2.3TUNEL法检测PASMCs凋亡：每只大鼠取1张肺组织石蜡切片，脱蜡水化后蛋白酶K（20μg/mg）37℃消化30min；3%H2O2溶液灭活过氧化酶；加TUNELrest