葛根素对低o高co肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体途径凋亡的影响_论文

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1、葛根素对低O2高CO2肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体途径凋亡的影响【摘要】目的:研究在慢性低O2高CO2情况下，葛根素对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)线粒体途径凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠40只，随机分为正常对照组(N组)、慢性低O2高CO22周组(H2w组)、慢性低O2高CO24周组(H4w组)、慢性低O2高CO24周＋葛根素组(H4w+G组)，每组10只。TUNEL法检测PASMCs凋亡；免疫组化测定PASMCs线粒体细胞色素C（Cyt-c）释放量及胞浆Bcl-2、Bax含量；分光光度法检测肺组

2、织匀浆caspase9酶活性。结果:①H2w组、H4w组和H4w+G组mPAP、RV/(LV+S)、PAMT、PASMCs胞浆Bcl-2含量均显著高于N组（P）。结论:葛根素有抑制慢性低O2高CO2肺动脉高压和肺血管重建的作用，促进PASMCs通过线粒体途径凋亡可能是其作用机制之一。【关键词】低氧慢性高血压肺性线粒体凋Abstract:Objective:Tostudytheeffectsofpuerarinonmitochondrial-dependentapoptosispathwayinpulomnar

3、yhypertensioninducedbyhypoxichypercapnia.Methods:FourtySprague-Dawleyratswererandomlydividedintofourgroups:normalcontrolgroup(N)，hypoxichypercapnic2weeksgroup10/10(H2w)，hypoxichypercapnic4weeksgroup(H4w)andhypoxichypercapnic4weeks+Pueraringroup(H4w+G).Theap

4、optsisofPASMCswastestedwithTUNEL.ThereleaseofCyt-cfrommitochondriaandthecontentofBcl-2andBaxincytoplasmweredeterminedwithimmunohistochemistry.Theactivityofcaspase9wasdetectedwithspectropho-tometricmethod.Results:①ThemPAP,RV/(LV+S),PAMTandthecontentofBcl-2of

5、PASMCsofgroupH2w，groupH4wandgroupH4w+GweresignificantlyhigherthanthoseofgroupN(P).Conclusion:Puerarincanlowerpulmonaryhypertensionandinhibitstructuralremodelingofpulmonaryarteries.Facilitatingmitochondrial-dependentapoptosisofPASMCsmaybeoneofthemechanismsof

6、thisaction.Keywords:hypoxia，chronic；hypertension，pulmonary；mitochondria；apoptosis；Puerarin低氧性肺血管重建中各种类型细胞凋亡减少而增殖增加[1]。肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryar-terysmoothmusclecells，PASMCs)是肺血管壁的主要组成部分，增加PASMCs凋亡可以逆转肺动脉高压肺血管重建[2]。细胞色素C(cytochromeC，Cyt-c)10/10从线粒体中释放是细胞线粒体途径凋亡的关

7、键步骤[3,4]。线粒体Cyt-c的释放受到Bcl-2蛋白家族的调控，Bcl-2和Bax蛋白是该家族中具有代表性的蛋白，分别起到抑制和促进凋亡的作用[5,6]。葛根素(Puerarin)是豆科植物野葛干燥根中的主要有效成分,大量研究发现，葛根素能促进主动脉平滑肌细胞的凋亡[7]。本实验拟通过研究葛根素对PASMCs线粒体Cyt-c释放、caspase9活性以及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，探讨葛根素促进PASMCs线粒体途径凋亡是否为其抑制肺动脉高压肺血管重建的作用机制。1材料和方法材料实验动物：雄性Sp

8、rague-Dawley（SD）大鼠40只，体重180～210g，由温州医学院实验动物中心提供。试剂：InSituCellDeathDetectionKit（德国Roche公司产品），Bcl-2、Bax兔抗大鼠多克隆抗体（美国SantaCruz公司产品），Cyt-c兔抗大鼠多克隆抗体（美国CellSignaling公司产品），ImmPRESSREAGENTAnti-RabbitIg多聚过氧化酶二抗(