高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷ⅳb的含量

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1、高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量【关键词】断血流胶囊；醉鱼草皂苷Ⅳb；高效液相色谱法　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodofHPLCfordeterminationofBuddlejasaponinsⅣbinDuanXueliuCapsules.MethodsTheRPHPLCmethodpackm×200mm,5μm).Themobilephaseethanol.Theflol·min-1.ResultsThecalibrationcurveslforBuddleja

2、saponinsⅣb.TheaveragerecoveryofBuddlejasaponinsⅣbethodissimple,accurateandcanbeusedfordeterminationofDuanXueliuCapsules.　　Keym×200mm，5μm）；流动相为甲醇-水（80∶20）；检测波长为250nm；流速1ml/min；柱温为室温；灵敏度0.04AUFS。　　2.2系统适用性实验在上述色谱条件下，精密吸取醉鱼草皂苷Ⅳb对照品溶液及供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图（见图1～2）。在该色谱

3、条件下，供试品色谱中在与醉鱼草皂苷Ⅳb对照品色谱相应的保留时间位置上有相应的色谱峰，理论板数按醉鱼草皂苷Ⅳb峰计算，对照品为2619，供试品为4737，主峰和杂峰之间的分离度均大于1.5，符合《中国药典》要求，规定理论板数按醉鱼草皂苷Ⅳb峰计算不得低于2000。在上述色谱条件下，精密吸取线性验证中序号为4的对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，连续进样操作5次，醉鱼草皂苷Ⅳb峰面积RSD值1.9%，对照品进样重复性符合《中国药典》要求。　　2.3专属性验证按照工艺，制成不含断血流的阴性样品，同供试品溶液制备法制备得阴性样溶液。在上述色

4、谱条件下，精密吸取阴性样品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图（见图3）。在该色谱条件下，在与醉鱼草皂苷Ⅳb保留时间相同的位置未出现色谱峰，表明其它成分对醉鱼草皂苷Ⅳb的测定无干扰，方法的专属性符合要求。　　2.5重复性实验取同一批号的供试品（050901），按供试品含量测定项下方法测定6次，结果醉鱼草皂苷Ⅳb平均含量为2.2mg/粒，RSD值为1.4%。　　2.6稳定性实验精密吸取断血流胶囊供试品（050901）溶液20μl，分别在0，4，8，24，28h测定，结果醉鱼草皂苷Ⅳb峰面积平均值为117154.4，RSD值为1.0

5、%。供试品溶液28h内稳定性良好，可满足测定时间的要求。　　2.7加样回收率实验精密称取已知含量的样品（050901）6份，分别精密加入不同浓度醉鱼草皂苷Ⅳb对照品溶液10ml，按供试品含量测定项下的方法进行操作，测定并计算样品中醉鱼草皂Ⅳb的回收率。结果见表1。表1醉鱼草皂苷Ⅳb加样回收率实验结果（略）　　2.8供试品的含量测定　　2.8.1对照品溶液的制备精密称取醉鱼草皂苷Ⅳb对照品适量，用甲醇制成每毫升含15μg的溶液，作为对照品溶液。　　2.8.2供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取0.3g，用75%乙

6、醇50ml分别超声提取（300in/次，滤过，滤液置100ml量瓶中，加75%乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。　　2.8.3测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，在上述色谱条件下注入液相色谱仪，测定，即得。　　2.8.45批样品含量测定结果见表2。表2样品含量测定结果（略）　　3讨论用高效液相色谱法测定断血流中醉鱼草皂苷Ⅳb含量，经线性、精密度（重复性实验、稳定性实验）、准确度（加样回收率实验）、专属性等方法学验证，证明其符合定量分析的要求，且简便、快速，适于作为断血流胶囊的含量测定方法。

7、故将已有标准中含量测定的方法由薄层扫描法修改为高效液相色谱法是可行的。　　3.1检测波长的选择取醉鱼草皂苷Ⅳb对照品适量，加甲醇溶解制成每毫升含0.01mg的溶液，结果在250nm处有较强的吸收，与文献［2～4］记载一致，故选择250nm处作为检测波长。　　3.2供试品溶液制备方法的选择将用3种方法制备的同一批号的供试品溶液注入色谱仪，测定。结果醉鱼草皂苷Ⅳb含量，方法1（按断血流片标准［4］中的方法）为1.48mg/粒，方法2（按文献［3］方法）为2.04mg/粒，方法3（溶剂改为甲醇，余同方法2）为1.92mg/粒。3种制备方法

8、测得的醉鱼草皂苷Ⅳb含量以方法1最低，方法2最高，且方法2操作的简便性、环保性也较好，故供试品制备方法选择方法2为宜。【参考文献】　　［1］卫生部药品标准·新药转正标准，第27册［S］.2000：53.　　［2］徐国兵，方晓明，樊和平