结直肠癌中cks1, p27kip1和skp2蛋白的表达

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1、结直肠癌中Cks1,P27Kip1和Skp2蛋白的表达【关键词】结直肠癌　　Cks1,P27Kip1andSkp2proteinexpressionincolorectalcancer　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheexpressionofCks1proteinanditsrelationshiporigenesis.METHODS:Floetryalcolorectalmucosas,20adenomasasalmucosa,adenomatocolorectalcancer(P<0.05),

2、eorder(P<0.05).Astrongcorrelationordifferentiation(P<0.05),butnotphnodemetastasisandDukesstaging(P>0.05).CONCLUSION:Cks1mayplayanimportantroleinhumancolorectaltumorigenesis.Cks1maybeanessentialfactorinproteasomedependentdegradationofP27Kip1regulatedbySkp2.　　【K

3、eys;cyclinkinasesubunit1;Sphasekinaseprotein2;P27Kip1protein;ubiquitin　　【摘要】目的：探讨Cks1在结直肠癌发生及其在Skp2调节P27Kip1降解过程中的作用.方法：应用流式细胞术测定正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤和结直肠癌组织中Cks1,P27Kip1和Skp2蛋白的表达.结果：由正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤到结直肠癌Cks1,Skp2表达呈上升趋势(P＜0.05)，P27Kip1表达呈下降趋势(P＜0.05).结直肠癌中Cks1,Skp2表达与P27Kip1表达

4、呈负相关(r=-0.752,P＜0.05;r=-0.746,P＜0.05)；Cks1与Skp2呈正相关（r=0.845,P＜0.05）.结直肠癌中Cks1的表达与肿瘤分化程度相关（P＜0.05），而与淋巴结转移及Dukes分期不相关（P＞0.05）.结论：Cks1可能参与了结直肠癌的发生；结直肠癌中Cks1可能参与了Skp2调节P27Kip1泛素化降解过程.　　【关键词】结直肠肿瘤；Cks1蛋白；Skp2蛋白；P27Kip1蛋白；泛素　　0引言　　许多恶性肿瘤中细胞周期性蛋白P27Kip1的表达是降低的，Fbox蛋白Sphaseki

5、naseprotein2（Skp2)参与了P27Kip1泛素化降解过程.Cyclinkinasesubunit1（Cks1)是高度保守的细胞周期调节蛋白Suc1/Cks家族成员之一，只有结合Cks1后，才能识别P27Kip1进行泛素化蛋白降解［1］.而Cks1在肿瘤组织中尤其在结直肠癌组织中的表达及其与P27Kip1,Skp2间的关联性罕见报道.我们用流式细胞仪检测了正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤和结直肠癌中Cks1,P27Kip1和Skp2的表达.　　1材料和方法　　1.1材料　　手术切除病理证实的结直肠癌标本54例，结直肠腺20例及

6、正常结直肠黏膜20例.术前均未行放化疗或免疫治疗.结直肠癌患者男29例，女25例，年龄24~76（平均52.4±8）岁；DukesA期5例，B期22例，C期18例，D期9例；有淋巴结转移26例，无转移28例.Cks1兔抗人mAb及Skp2鼠抗人mAb购自美国ZYMED公司，P27Kip1鼠抗人mAb购自丹麦DAKO公司.　　1.2方法　　新鲜组织块1.0cm×1.0cm×1.0cm,PBS洗净，机械破碎法制成单细胞悬液，0.5mL加入两只小试管，PBS液洗涤1次，离心，弃上清，试管内加入兔抗人Cks1（或P27Kip1,Skp2）荧

7、光mAb10μL，对照管加入PBS，混匀，4℃孵育30min,PBS洗涤1次，离心，清除多余未结合抗体后上机检测.每1标本检测1×105个细胞.Cks1（或P27Kip1,Skp2）阳性率={［试管中Cks1（或P27Kip1,Skp2）阳性细胞数－阴性对照阳性细胞数］/10000}×100%.　　统计学处理：数据用x±s表示，采用SPSS10.0统计分析软件，3组间样本比较应用方差分析，各组间两两比较采用SNKq检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析，P<0.05为有显著性差异.　　2结果　　从正常肠黏膜、结直肠腺

8、瘤到结直肠癌组织Cks1,Skp2蛋白表达呈上升趋势(P＜0.05)；而P27Kip1呈下降趋势(P＜0.05，表1）.结直肠癌组织中Cks1表达与癌组织分化程度相关，低分化者Cks1表达率明显高于中、高分化者［(49.5±5.6）v