虎仗提取物白藜芦醇诱导胃癌细胞hgc27凋亡

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1、虎仗提取物白藜芦醇诱导胃癌细胞HGC27凋亡【关键词】胃肿瘤　　【Abstract】AIM:ToexploretheinductiveeffectsoftheresveratrolfromRhizomapolygoniCuspidationthecellcycles,groethodandsoftagarassayedtoobservetheeffectsoftheresveratrolonthecellgrop;PIstainingassayandFCMassayinetheinductiveeffectsofresveratrolon

2、thecellcyclesandapoptosis.RESULTS:MTTresultsmanifestedthatthecellsurvivalratedecreasedsignificantlyandindosedependentmanner24hafterHGC27mol/Lresveratrol(P<0.01vscontrol).SoftagarassayresultsindicatedthatHGC27couldnotformcellcolonymol/Lresveratrol.AnnxinVPIstainingassay

3、andFCMassayshoachneoplasm;tumorcells;HGC27　　【摘要】目的：观察虎仗提取物白藜芦醇对胃癌细胞HGC27细胞周期和增殖的影响及凋亡诱导作用.方法:采用MTT法和软琼脂集落形成实验观察白藜芦醇对细胞增殖的影响，AnnxinVPI染色及流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响及诱导凋亡的作用.结果：MTT实验发现白藜芦醇作用HGC27细胞24h后，细胞存活率显著下降（P<0.01）并呈剂量依赖性，软琼脂集落形成实验发现HGC27细胞在0.5mmol/L白藜芦醇作用下无细胞集落的形成，Annxin

4、VPI染色及流式细胞仪检测发现白藜芦醇可引起HGC27阻滞于G1期，并可诱导HGC27发生凋亡(8.39%).结论：白藜芦醇可抑制胃癌细胞HGC27增殖并可诱导细胞发生凋亡.　　【关键词】白藜芦醇；凋亡；胃肿瘤；肿瘤细胞；HGC27　　0引言　　从天然生物中寻找低毒，高效的抗肿瘤药物已成为近年的研究热点［1］.白藜芦醇是植物在遇到真菌感染、紫外线照射等恶劣环境下自身分泌的一种天然抗毒素，广泛存在于百合科、蓼科、豆科等21个科31个属的72种植物中.研究发现白藜芦醇不仅具有调节脂质代谢、抑制血小板聚集、保护心血管等多方面的作用，而且对乳腺癌

5、、前列腺癌和白血病等一些肿瘤细胞系的生长具有显著抑制作用［2-5］.我们采用软琼脂集落形成实验、MTT实验、AnnexinVPI细胞染色实验、流式细胞仪检测方法对白藜芦醇抑制胃癌细胞增殖，诱导细胞凋亡及对细胞周期的影响进行研究如下.　　1材料和方法　　1.1材料　　人胃癌细胞株HGC27购自中国科学院上海细胞研究所细胞库；RPMI1640培养基（Gibco公司）；新生牛血清（杭州四季青生物工程公司）；MTT（华美公司Sigma分装）；DMSO（Sigma公司）；琼脂粉（北京百灵克公司Sigma分装）；NUAIRECO2细胞培养箱（auto

6、Flomol/L溶液，分装，-20℃储存.细胞采用含100mL/L小牛血清的RPMI1640培养基，置于37℃含50mL/LCO2的细胞培养箱中培养.2.5g/L胰蛋白酶和0.2g/LEDTA消化、传代.　　1.2方法　　1.2.1MTT法调整单细胞密度1×107/L，接种于96孔培养皿内，24h后试验组分别加入含有不同浓度的白藜芦醇(0.1~1.0mmol/L)，对照组细胞加入同体积的药物溶剂，空白对照孔不加细胞，作本底对照调零.实验做6个平行复孔.细胞分别培养24,48和72h后，吸尽旧培养液，加入含5g/LMTT的培养基150μL，

7、继续培养4h，吸尽培养液，加入二甲基亚砜，振荡至紫色结晶完全溶解，用酶标仪测定每孔的A570nm值(选择波长570nm，参考波长620nm).计算瘤细胞存活率=(实验组A570nm值/对照组A570nm值)×100%，绘制药物浓度存活率曲线.　　1.2.2Softagarassay配制底层5g/L软琼脂，顶层3g/L软琼脂的生长体系，接种7×1010/L个细胞于顶层软琼脂，实验组同时加入白藜芦醇(使其终浓度为0.5mmol/L)，每个样品做3个复孔，CO2培养箱中培养2mol/L)共同孵育，对照组加入同体积的DMSO.药物作用24h后收集

8、细胞，1500r/min离心5min，吸弃上清，PBS洗1次，加无水乙醇（终体积分数为70%），置-20℃固定保存.检测时用PBS洗细胞2次，PI暗处染色20min后上流式细胞仪检测.Cell