滇丹参中丹酚酸b提取及纯化工艺研究

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1、滇丹参中丹酚酸B提取及纯化工艺研究摘要：目的：优选滇丹参提取及絮凝沉降法纯化丹酚酸B的最佳工艺。方法：以滇丹参主要成分丹酚酸B含量为评价指标，采用正交试验优选提取及纯化的最佳条件。结果：滇丹参的最佳提取条件为8倍量水，煎煮2次，每次1h；采用ZTC11+1为絮凝沉降剂，药液浓度在1g/5mL，絮凝剂的用量是B∶A=4∶2，搅拌速度为100r/min时，得到的精制液中丹酚酸B含量最高。结论：使用絮凝澄清的方法精制水提液，用量少，污染小，丹酚酸B的含量损失较少。　　关键词：滇丹参；丹酚酸B；ZTC1+1型絮凝剂　　：R

2、284.3：A　　：1007-2349（2011）05-0061-02　　　　滇丹参为唇形科鼠尾草属植物云南鼠尾草（salviayunnanensisC.H.L含0.192mg的溶液，即得。色谱条件：Agilent-C18色谱柱（Φ4.6mm×250mm，5μm）；甲醇-乙腈-甲酸-水体积比（26∶9∶1∶64）为流动相；柱温：35℃；检测波长：286nm；流速：0.8mL/min；理论塔板数按丹酚酸B计不低于2000。　　2.1.2线性关系的考察分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液4、6、8、10、12、14μL，在

3、上述色谱条件下依次进样测定。以峰面积积分值为纵坐标，对照品的进样量为横坐标进行线性回归，得到回归方程为Y=895054x-68669，相关系数r=0.9999。结果表明丹酚酸B进样量在0.768～2.688μg范围内与峰面积呈现良好线性关系。　　2.1.3样品测定精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL进样，以外标法计算含量。　　2.2提取工艺研究　　2.2.1提取溶剂的选择分别称取40g（准确到0.01g）药材4份，分别以水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇为溶剂，加入8倍量溶剂提取1.5h，过滤，滤渣再用6倍

4、量溶剂提取1h，合并滤液，浓缩并定容到500mL，用微孔滤膜（0.45μm）过滤，精密吸取10μL溶液，注入液相色谱仪，测定丹酚酸B的含量，结果分别为2.18%、2.45%、2.37%、2.09%。表明30%乙醇提取含量最高，但以水为溶剂时，与30%乙醇提取率相差不大，因考虑实际生产的需要，故以水为提取溶剂。　　2.2.2水提工艺正交实验设计　　2.2.2.1设计方案以加水量、提取时间、提取次数为考察因素，以丹酚酸B含量为评价指标，每个因素选取3个水平，采用正交表L9（34）安排试验，因素水平表见表1。　　2.

5、2.2.2实验方法称取药材9份，每份20g，按照正交实验表进行试验，滤液浓缩并定容到500mL，用微孔滤膜（0.45μm）过滤，精密吸取溶液10μL，注入液相色谱仪，测定。　　2.2.2.3实验结果结果见表2。根据直观分析结果表明，紫丹参的最佳水提工艺为8倍量水，提取3次，每次1h，即A2B1C3。由于提取3次和2次的结果相差不大，为了节约成本，将工艺定为8倍量水，提取2次，每次1h，即A2B1C2。　　2.3絮凝澄清纯化工艺研究　　2.3.1ZTC1+1澄清剂溶液的配制①A组分溶液的配制称取ZTC1+1Ⅲ澄

6、清剂A组分1g，先用少量蒸馏水搅成糊状，然后加蒸馏水至100mL，溶胀24h，搅匀，双层纱布滤过，即得1%A组分黏胶液；②B组分溶液的配制称取ZTC1+1Ⅲ澄清剂B组分1g，用少量1%醋酸溶液溶解并搅成糊状，然后加1%醋酸至100mL，溶胀24h，搅匀，双层纱布滤过，即得1%B组分黏胶液。　　2.3.2设计方案经过预实验，发现丹酚酸B在60℃时絮凝效果较好，故以60℃为絮凝温度，采用正交试验对絮凝澄清工艺的主要工艺参数进行优化。选择药液浓度、ZTC1+1絮凝剂加入量、搅拌速度3个主要影响因素进行考察，以丹酚酸B含量

7、作为评价指标，用L9（34）正交表安排试验方案，因素水平设计见表3。　　2.3.3实验方法按上述最佳提取工艺提取药材，按正交试验设计浓缩至不同浓度，分别量取9份浓缩药液，每份50mL，在60℃时，加入4mL的1%B组分溶液用相应的旋转速度搅拌15min，保温1h，搅拌3min，然后每隔30min左右搅拌3min；1h后，于60℃温度恒温搅拌下，分别加入1%A组分黏胶液搅拌3min，保温15min，离心过滤，精密量取1mL定容至100mL，用0.45μm的微孔滤膜滤过，测定丹酚酸B含量。　　2.3.4实验结果结果

8、见表4~表5。由直观分析可知，影响絮凝澄清的因素顺序为：药液浓缩比>絮凝剂组分比>搅拌速度，最佳工艺组合为A1B1C2。方差分析显示，药液浓度对精制工艺具有显著性影响。　　2.3.5验证试验平行取相同量的药液3份，每份50mL。按上述确定的最佳工艺条件进行验证。同时测得丹酚酸B含量分别为35.62、35.85、35.77mg/g，验证结果与正