分光光度法测定藏药鬼箭锦鸡儿中总黄酮的含量

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1、分光光度法测定藏药鬼箭锦鸡儿中总黄酮的含量【摘要】　　目的建立藏药鬼箭锦鸡儿中总黄酮的含量测定方法。方法采用正交实验设计，以总黄酮含量为考察指标，研究藏锦鸡儿总黄酮的最佳提取方法；并利用分光光度法，以芦丁为对照品，对藏锦鸡儿原药材中的总黄酮含量进行测定。结果该药材红色木质部心材中总黄酮的含量为13.56%。结论该工艺合理，黄酮有效成分提取率高。该方法测定样品结果准确可靠、快速、重复性好。【关键词】藏药鬼箭锦鸡儿总黄酮分光光度法　　Abstract：ObjectiveTosetupthequantitativemethodfordeterminingthetotalflavonoidinTib

2、etanherbCaraganajubata(Pall)Poir.Methodsumextractingmethodentdesign,andtheflavonoidsintherootsandcaudicesofCaraganajubata(pall)poireticmethodple.ConclusionTheoptimumpreparationprocedureisreliableethodisreliable,accurate,quickandreproducible.　　Keyetry　　藏锦鸡儿学名鬼箭锦鸡儿Caraganajubata(Pall)Poir，藏名“作毛兴”，为豆科

3、锦鸡儿属植物，是叶型较小的中生、中旱生、旱生和沙生灌木。生长在海拔3000~4700m的阴坡、半阴坡地带〔1~3〕。藏医用其根茎及其干燥红色木质部心材入药，其味涩、性凉。具有活血散瘀、凉血、降压、生肌止痛的功能，可用于防治多血症、血热症、高血压病和心血管等方面的疾病〔4〕。鬼箭锦鸡儿中含有黄酮类、皂苷、生物碱、鞣质、挥发油和糖类等化学成分〔5〕。本文采用正交实验法研究了鬼箭锦鸡儿中总黄酮的最佳提取条件，同时对其总黄酮含量进行了测定〔6~8〕。　　1仪器、试剂及样品采集　　1.1仪器与试剂722型可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；分析天平；芦丁(中国药品生物品检定所)；乙醇等试剂均为

4、分析纯；常用玻璃仪器等。　　1.2样品采集鬼箭锦鸡儿采自海拔4000m以上的青藏高原地区（青海省藏药研究所多杰研究员鉴定），去掉外皮，取红色木质心材，切断，阴干，粉碎后过40目筛作为实验药材。　　2方法与结果　　2.1对照品芦丁标准溶液的制备精密称取芦丁标准样品0.0250g，75%乙醇溶解并定容至100ml容量瓶中稀释到刻度。　　2.2最大吸收波长的确定取芦丁标准溶液4ml采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色,在470~560nm波长范围内测定溶液的吸光度。测定结果见表1。由此可见，在510nm处有最大吸收值,所以,可以选择510nm作为检测波长。　　2.3正交实验　　2.3.1

5、正交实验设计方案选择乙醇浓度(A)，回流时间(B)，药材重量与乙醇体积比(C)为实验3个考察因素，每个因素取3个水平(见表2)，应用L9(34)表安排实验，以鬼箭锦鸡儿中总黄酮的含量为评价指标，研究其最佳提取条件。　　表1不同波长下芦丁标准溶液对应的吸光度（略）　　表2总黄酮提取条件因素水平（略）　　2.3.2正交实验结果正交实验数据及计算分析见表3。直观分析表明，影响鬼箭锦鸡儿总黄酮提取率的主要因素依次为：乙醇浓度＞物料比＞回流时间，其中乙醇浓度对总黄酮的提取率有显著影响，最佳提取条件为A2B1C2。　　2.4藏锦鸡儿药材中黄酮提取方法的确定准确称取已粉碎过筛后的藏锦鸡儿红色木质心材10g

6、于烧瓶中，加入100ml石油醚回流40min进行脱脂，弃去滤液，再加入100ml75%的乙醇，回流提取30min，3次，弃去滤渣，合并滤液后进行蒸馏浓缩，用75%乙醇定容至250ml量瓶中，得总黄酮提取物，用于含量的测定。　　2.5实验测定条件的选择　　2.5.1氢氧化钠溶液用量的选择精密吸取芦丁标准溶液2ml各4份，分别置于25ml容量瓶中，各加5%亚硝酸钠溶液1.0ml，再加10%硝酸铝1.0ml，然后分别加入10%氢氧化钠5，10，15，20ml，再用75%乙醇溶液稀释至刻度，分别在510nm处测定其吸光度（见表4）。经实验考察结果，选择测定时加入10%NaOH10ml时为最佳。　　2

7、.5.2硝酸铝溶液用量的选择同以上方法，在装有标准溶液的4份样品中，各加5%亚硝酸钠溶液1.0ml，再分别加入10%硝酸铝溶液0.5，1.0，1.5，2.0ml，然后分别加入10%氢氧化钠10ml。实验结果见表5。由此可知，实验选择Al(NO3)3加入量为1.5ml为最佳。　　2.5.3反应温度的选择同以上方法，取芦丁标准溶液1份，加1.0ml5%亚硝酸钠溶液，1.5ml10%硝酸铝溶液，10%氢氧化钠10m